sunshineZY 发表于 2017-5-3 14:54
刚刚做的磷钨酸复染外泌体电镜，没有看到大神这样的外泌体。也不知道自己的是不是，问题出在哪里，想请大神 ...
很可能是因为外泌体样品就没有准备好。 提取的外泌体样品可能就没有几个外泌体
刚一直没有上传成功图片，现在请您看看这几张。是染色问题还是没有外泌体？
sunshineZY 发表于 2017-5-3 16:21
刚一直没有上传成功图片，现在请您看看这几张。是染色问题还是没有外泌体？ ...
不是很清楚你拍成这样的原因。降低染料的浓度试试吧。 不过感觉像是外泌体样品可能就不太好。。。
好的。谢谢你，O(∩_∩)O我继续摸索一下提取吧。我是用SBI试剂盒提取的。
hzangs 发表于 2017-3-1 10:42
不会有问题的。 充分的吹打 吹打完了过于粘稠的部分就不要了。为了电镜 我直接用掉了这一批样本 ...
请教版主，怎样才叫充分吹打呢？这个又不像吹细胞，能看得到沉淀被吹没了。不知道外泌体可以涡旋振荡一下混匀么？怕不怕把它给振破了？
另外请教版主，您超离之后管底看得到沉淀么？吸掉上清的时候是把上清都洗干净呢，还是留一点点底呢？我好怕把外泌体给吸走了。
kerstin_yang 发表于 2017-6-5 16:37
请教版主，怎样才叫充分吹打呢？这个又不像吹细胞，能看得到沉淀被吹没了。不知道外泌体可以涡旋振荡一下 ...
吹打到看不到任何不溶物即可。我是用吸泵吸掉上清，不是倒掉。
hzangs 发表于 2015-4-29 11:18
我用的细胞 25cm培养皿一个长满基本上是1000w细胞。
那是怎么来的40ml培养液呢？ 一个25培养瓶就是1000万那两个不久是2000万？两个培养瓶不够40ml啊
hzangs 发表于 2015-4-23 11:35
exosomes样品10ul 铜网上沉淀1分钟，吸水纸吸去多余液体；负染1分钟，吸水纸吸去多余液体。上机 。
应该 ...
请问对电镜有特殊要求吗？
大神，我看到你第一张照片中的外泌体中有三个尺寸大约在30-40nm，这是因为干燥过程中皱缩了吗？我用蔗糖梯度提纯的外泌体，拍电镜后，好多尺寸都在50nm左右，并没有太多文献中所提到的100nm左右，就像你第二张图中的辣么美
hzangs 发表于 2015-4-29 11:18
我用的细胞 25cm培养皿一个长满基本上是1000w细胞。
请问大神，25cm是直径还是半径还是面积？