做WB前外泌体处理

yuantingdong · 发表于 2016-10-19 08:31:41

请教一下，外泌体抽提后做WB，但不是立马做，是用PBS溶解放-80°C保存吗？如果这样，在提取蛋白之前用多大离心力可以把外泌体从PBS中分离沉淀出来？谢谢！

yuantingdong · 发表于 2016-10-19 10:06:42

hzangs 发表于 2016-10-19 09:48
一样要用超速离心才行。如果你短期做的话不必-80. 我试过 -20的样品一周内跑WB 没问题的 ...

我们这边超速离心不方便，那是不是意味着每次提外泌体之后就要立马提蛋白？谢谢！

yuantingdong · 发表于 2016-10-19 16:51:44

hzangs 发表于 2016-10-19 14:42
一般我会把外泌体样品重悬在约100ul PBS中，取部分做蛋白定量，然后剩下的直接冻在-20。用的时候吸取 ...

但是重悬在PBS中后，就必须得超离后才能提蛋白，不能直接处理，问题是我这边不能超离，那是不是就得分开做？

yuantingdong · 发表于 2016-10-21 11:23:43

hzangs 发表于 2016-10-19 20:57
不用提蛋白。直接吸几十微升样品加loading 煮即可

请问版主，加loading煮了之后直接上样吗？我第一次听说可以这样，不提蛋白如何做WB，望不吝赐教！谢谢

yuantingdong · 发表于 2016-10-21 11:25:16

hzangs 发表于 2016-10-19 20:57
不用提蛋白。直接吸几十微升样品加loading 煮即可

版主有没有具体的步骤或者其链接或者文献，最近要做这个，谢谢了！

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