做WB前外泌体处理

yuantingdong · 发表于 2016-10-19 08:31:41

请教一下，外泌体抽提后做WB，但不是立马做，是用PBS溶解放-80°C保存吗？如果这样，在提取蛋白之前用多大离心力可以把外泌体从PBS中分离沉淀出来？谢谢！

atropine90 · 发表于 2017-10-31 21:09:07

步步唧唧发表于 2017-6-29 11:05
版主问一下提取到的外泌体跑WB，是exo直接加缓冲液煮，然后直接做跑WB吗？那不是所有蛋白都会跑出来吗 ...

感觉这位层主连WB的原理都不清楚啊.... 敷抗体啊！

shuhun · 发表于 2017-6-9 15:30:23

请问用试剂盒提取的外泌体如何做WB

yuantingdong · 发表于 2016-10-21 11:23:43

hzangs 发表于 2016-10-19 20:57
不用提蛋白。直接吸几十微升样品加loading 煮即可

请问版主，加loading煮了之后直接上样吗？我第一次听说可以这样，不提蛋白如何做WB，望不吝赐教！谢谢

hzangs · 发表于 2016-10-19 20:57:56

yuantingdong 发表于 2016-10-19 16:51
但是重悬在PBS中后，就必须得超离后才能提蛋白，不能直接处理，问题是我这边不能超离，那是不是就得分开 ...

不用提蛋白。直接吸几十微升样品加loading 煮即可

步步唧唧 · 发表于 2017-6-29 11:05:05

hzangs 发表于 2017-6-21 12:33
嗯嗯

版主问一下提取到的外泌体跑WB，是exo直接加缓冲液煮，然后直接做跑WB吗？那不是所有蛋白都会跑出来吗？怎么鉴定标志戴白CD9\CD63\TSG101什么的啊？如何区分？用什么Marker

DBLB · 发表于 2019-10-21 13:20:50

zhaojing 发表于 2018-11-28 17:46
求版主赐教在提取样品，重悬在PBS后进行WB的步骤，包括加loading煮的推介量呀 ...

多少都行，粒子数够，几微升都跑的出来。

zhaojing · 发表于 2018-11-28 17:46:12

求版主赐教在提取样品，重悬在PBS后进行WB的步骤，包括加loading煮的推介量呀

zhangning · 发表于 2018-11-18 21:18:42

楼主楼主，现在求教，pbs重悬的exo到底应该怎么处理

布酱 · 发表于 2018-3-22 14:23:18

hzangs 发表于 2018-3-22 11:47
跟常规的WB 一样操作即可

好的，谢谢

hzangs · 发表于 2018-3-22 11:47:15

布酱发表于 2018-3-22 09:11
新手一枚，请问hzangs老师，做WB前期处理上样缓冲液一般用什么，金属浴还是水浴？时间是多久？ ...

跟常规的WB 一样操作即可

布酱 · 发表于 2018-3-22 09:11:32

hzangs 发表于 2017-6-21 12:33
嗯嗯

新手一枚，请问hzangs老师，做WB前期处理上样缓冲液一般用什么，金属浴还是水浴？时间是多久？

lz93046 · 发表于 2017-11-1 22:04:47

上多少样呢？

EV-yyb · 发表于 2017-10-20 23:37:38

猫头鹰爱睡觉觉发表于 2017-3-2 11:35
我超离的exo，沉淀直接加20ulPBS重悬，冻在-80度一个月后跑WB都可以，直接加5X loading buffer 98度变性5分 ...

那请问你加多少loading，上多少外泌体的量呢？

纪南方 · 发表于 2017-8-3 09:34:36

请问大神们用的是哪家的抗体啊?

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