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楼主: 宋梦阳
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PKH67染色

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发表于 2016-10-17 14:41:52 | 只看该作者
惜名 发表于 2015-12-19 09:28
对的,是这样的步骤。
根据SBI官方的说明,如果你能把最终的体积控制在0.5ml,然后加入0.1ml的ExoQuick, ...

惜名兄,我查看SBI说明书,步骤跟你说的不一样,为何你的是4度静置40-60min,然后12000*4min离心。谢谢。
SBI试剂盒提取外泌体具体步骤:
1、细胞培养液离心,3000g *15min,取上清。
2、培养液上清与提取试剂(ExoQuick-TC)5:1,颠倒3次,静置12小时。
3、离心1500g *30min,吸除上清。
4、离心1500g*5min,进一步去除残余上清。
5、鉴定:50ulPBS重悬,-80℃保存。
   提蛋白:加蛋白裂解液
   提RNA:加trizol
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发表于 2016-10-18 17:23:46 | 只看该作者
yuantingdong 发表于 2016-10-17 14:41
惜名兄,我查看SBI说明书,步骤跟你说的不一样,为何你的是4度静置40-60min,然后12000*4min离心。谢谢。
...

静置40-60min是因为我浓缩以后,体积很小了,只要半个多小时就可以。如果你是10ml的体积,还是要过夜的
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发表于 2016-10-22 15:55:26 | 只看该作者
惜名 发表于 2015-9-16 14:44
可以。
我就是这么干的。

求荧光标记后,不用超速离心,再次用EXOquick的具体步骤~谢啦!!☆⌒(*^-゜)v
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发表于 2016-10-22 16:09:01 | 只看该作者
惜名 发表于 2015-9-16 14:44
可以。
我就是这么干的。

请问惜名前辈,荧光标记,BSA终止标记后需要加多少PBS,然后再用EXOquick啊?老害怕提两次,会有很多杂质,而且多余的荧光会不会干扰BCA蛋白测定结果呢?
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发表于 2016-10-22 20:38:31 | 只看该作者
小七果果8 发表于 2016-10-22 16:09
请问惜名前辈,荧光标记,BSA终止标记后需要加多少PBS,然后再用EXOquick啊?老害怕提两次,会有很多杂质 ...

不用加PBS了啊。。。我直接加exoquick然后静置、离心的。。。但是,有时看不到沉淀,感觉不是很稳定~
多余的荧光染料估计很难避免,所以如果能用超离是最好的。试剂盒总是存在各种污染的问题
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发表于 2016-10-22 21:23:27 | 只看该作者
惜名 发表于 2016-10-22 20:38
不用加PBS了啊。。。我直接加exoquick然后静置、离心的。。。但是,有时看不到沉淀,感觉不是很稳定~
多 ...

之前用BSA终止标记,14000g离心2h后并没有发现什么沉淀,测BCA含量很低,这次没有用超速离心,是标记后又加了次exoquick,1500g 30min,测BCA浓度3000微克/ml,感觉这次提出来浓度太高,害怕是杂质……对了前辈,用100000g超离会不会损伤外泌体活性,因为我打算做的是动物实验,求指导~
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发表于 2016-10-29 22:12:31 | 只看该作者
宋老师,给我发一份PKH染色的步骤,谢谢!815018560@qq.com
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发表于 2016-10-31 14:46:52 | 只看该作者
惜名 发表于 2015-8-22 10:15
是时候亮出这篇文献了:Cardiac fibroblast-derived microRNA passenger strand-enriched exosomes mediate ...

请问外泌体染色之后直接跟细胞一起培养吗,细胞要怎么染色?
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发表于 2016-11-7 15:53:17 | 只看该作者
宋梦阳 发表于 2015-10-13 11:19
我发现我现在是加了1ul的PKH67与750ul的Diluent C混合,然后EXO与250ul Diluent Ca混合,这样很节省,效果 ...

宋老师,麻烦您给我发一份PKH67染色步骤和相关文献吧,非常感谢,好人一生平安,59418976@qq.com
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发表于 2016-12-1 10:38:47 | 只看该作者
宋梦阳 发表于 2015-10-13 11:19
我发现我现在是加了1ul的PKH67与750ul的Diluent C混合,然后EXO与250ul Diluent Ca混合,这样很节省,效果 ...

求pkh67染色具体方法,谢谢。553926837@qq.com
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