外泌体BCA测出蛋白浓度太低,请教大家
我用2016年的protocol超离的外泌体,看不到沉淀,重悬在200ulPBS中-80保存,4天后不加裂解液,直接BCA测定蛋白浓度,想跑标志蛋白的western,蛋白浓度很低,只有0.396ug/ul,请问大家可能是哪里出了问题?baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul, 浓度还可以,一般上样量5-10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了(CD63,Tsg101,Flotilin 1 ...
谢谢,明天就准备干起来了! 0.4ug/ul, 浓度还可以,一般上样量5-10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了(CD63,Tsg101,Flotilin 1)。 baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul, 浓度还可以,一般上样量5-10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了(CD63,Tsg101,Flotilin 1 ...
你好,我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体,结果怎么都做不出来,想问下是抗体的原因吗?电镜做了能看到外泌体的结构 张外泌体 发表于 2016-12-22 08:43
你好,我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体,结果怎么都做不出来,想问下是抗体的原因吗? ...
CD63:Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1: BD Bioscience
这些是我用的抗体,效果还不错。
你试试actin或GAPDH抗体,外泌体中可以检测到这两个蛋白。或者转膜后用立春红染色看看蛋白含量。
baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-23 01:56
CD63:Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1: BD Bioscience
这些是我用的抗体,效果还不错。
我试一下,太谢谢你了 楼主,新手问一下,你BCA测浓度,是用的试剂盒吗 今日事今日毕 发表于 2017-1-3 11:12
楼主,新手问一下,你BCA测浓度,是用的试剂盒吗
都是实验室可以直接领的试剂,没有试剂盒。 我也没有看到沉淀,正在测浓度 张外泌体 发表于 2016-12-22 08:43
你好,我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体,结果怎么都做不出来,想问下是抗体的原因吗? ...
测BCA 需要先裂解吗