huangjingwei24 发表于 2018-4-18 16:01:36

baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul， 浓度还可以，一般上样量5－10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了（CD63，Tsg101，Flotilin 1 ...

请教一下，按照这个标准，蛋白浓度 0.4ug/ul，总上样量5ug， 也需要125ul了啊，SDS-PAGE最大的孔也就80ul吧。
我也遇到WB检测不出来标志蛋白条带的情况。

baishixiaoyaozi 发表于 2018-4-19 00:07:42

huangjingwei24 发表于 2018-4-18 16:01
请教一下，按照这个标准，蛋白浓度 0.4ug/ul，总上样量5ug， 也需要125ul了啊，SDS-PAGE最大的孔也就80ul ...

5 ÷ 0.4 = 12.5ul
我应该没算错吧。

baishixiaoyaozi 发表于 2018-4-19 00:09:04

huangjingwei24 发表于 2018-4-18 16:01
请教一下，按照这个标准，蛋白浓度 0.4ug/ul，总上样量5ug， 也需要125ul了啊，SDS-PAGE最大的孔也就80ul ...

5 ÷ 0.4 = 12.5ul
我应该没算错吧。

DBLB 发表于 2019-10-11 19:11:06

baishixiaoyaozi 发表于 2018-4-19 00:07
5 ÷ 0.4 = 12.5ul
我应该没算错吧。

您好，我检测出来蛋白质浓度很低，基本上检测不到，用BCA检测只有30ng/ul左右，但是WB却没有问题，条带很亮。请问这种情况怎么办。我想知道我提取出来的外泌体的真实蛋白浓度。

CheungKL 发表于 2019-10-22 14:47:47

DBLB 发表于 2019-10-11 19:11
您好，我检测出来蛋白质浓度很低，基本上检测不到，用BCA检测只有30ng/ul左右，但是WB却没有问题，条带很 ...

你好，请问你wb的外泌体样品是怎么处理的？跑的是哪些marker呢？谢谢

DBLB 发表于 2019-10-22 15:00:56

CheungKL 发表于 2019-10-22 14:47
你好，请问你wb的外泌体样品是怎么处理的？跑的是哪些marker呢？谢谢

200ml培养上清超离，2mlPBS重悬。检测了CD63

zhangchao 发表于 2020-7-6 18:50:32

JKF 发表于 2018-1-23 21:25
测BCA 需要先裂解吗

你好 你裂解了么

zhangchao 发表于 2020-7-9 18:08:57

exosun 发表于 2017-2-12 19:08
都是实验室可以直接领的试剂，没有试剂盒。

你好，请问外泌体的裂解你是怎么配制的呀

sy123 发表于 2022-3-22 17:46:59

我提的外泌体：40ml细胞上清   沉淀法提取   200ul重悬BCA测浓度0.3ug/ul

kaduoniya 发表于 2022-3-25 11:13:31

sy123 发表于 2022-3-22 17:46
我提的外泌体：40ml细胞上清   沉淀法提取   200ul重悬BCA测浓度0.3ug/ul

请问，您用的是什么细胞，培养多久后收集的细胞上清
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