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怎么比较不同细胞分泌的外泌体的量?

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发表于 2016-7-2 16:27:27 | 显示全部楼层 |阅读模式
现有普通细胞和病毒感染后的细胞,想比较这两种细胞分泌的外泌体的量。现在的做法是:用相同的细胞数铺板,两天后取上清,提外泌体,用相同体积的裂解液裂解,作WB时上样上相同的体积,结果显示两种细胞外泌体含量不同。但是现在存在的问题是 两种细胞增殖速度不同,培养两天 取上清后 计数,两者的细胞个数大概是3:4,这样的话,细胞个数不同 分泌的外泌体数量肯定不同。请问 这个思路对吗 还是说做WB之前必须要BCA定量 上样上相同量的蛋白?
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发表于 2016-7-4 18:28:25 | 显示全部楼层
理论上你要比较不同细胞分泌的外泌体的量,应该是比较相同的细胞量来源的外泌体的数量
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发表于 2016-7-5 10:47:39 | 显示全部楼层
建议跳过比量,直接比效果,量没有什么精确的方法,意义也不是很大。
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 楼主| 发表于 2016-7-5 15:02:10 | 显示全部楼层
Johnny 发表于 2016-7-4 18:28
理论上你要比较不同细胞分泌的外泌体的量,应该是比较相同的细胞量来源的外泌体的数量 ...

是的 Johnny兄 我也觉得 提外泌体是应该保证细胞量相等,但是细胞转进病毒之后 增殖速度跟转病毒之前就不一样了,如果增殖快的早点提 增殖慢的晚点提,来保证细胞数量相等,那分泌外泌体的时间又不一样了 还是没有可比性见多识广的Johnny兄,有没有什么建议 或者你有没有看到过相似研究的文献?
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 楼主| 发表于 2016-7-5 15:05:43 | 显示全部楼层
hereissyk 发表于 2016-7-5 10:47
建议跳过比量,直接比效果,量没有什么精确的方法,意义也不是很大。

谢谢你的建议。我原本的思路是研究某种基因能否影响外泌体的分泌。。。有看过类似的报道吗?
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发表于 2016-7-5 16:42:06 | 显示全部楼层
sldingxiang 发表于 2016-7-5 15:02
是的 Johnny兄 我也觉得 提外泌体是应该保证细胞量相等,但是细胞转进病毒之后 增殖速度跟转病毒之前就不 ...

同hereissyk兄,量没有什么精确的方法,实验操作、仪器本身等各方面误差很大,除非你的细胞分泌的外泌体量有好几倍甚至数量级上的差异,倒是可以比较,这时候你收上清时细胞的3:4差异也就忽略不计了

同样,建议直接比作用,找表型,这才是关键。
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 楼主| 发表于 2016-7-5 16:59:27 | 显示全部楼层
Johnny 发表于 2016-7-5 16:42
同hereissyk兄,量没有什么精确的方法,实验操作、仪器本身等各方面误差很大,除非你的细胞分泌的外泌体 ...

嗯 谢谢建议。感觉走到了死胡同,是要改变思路了~
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发表于 2016-7-5 22:38:56 来自手机 | 显示全部楼层
请问外泌体要怎么测质量
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 楼主| 发表于 2016-7-6 10:25:55 | 显示全部楼层
hlqp 发表于 2016-7-5 22:38
请问外泌体要怎么测质量

没有测质量 直接做的WB定量
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发表于 2016-7-6 13:03:24 来自手机 | 显示全部楼层
那提取外泌体全部过程是不是最好在无菌条件下呢?重悬外泌体的PBS要过滤过吗?谢谢
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