怎么比较不同细胞分泌的外泌体的量？

sldingxiang · 发表于 2016-7-2 16:27:27

现有普通细胞和病毒感染后的细胞，想比较这两种细胞分泌的外泌体的量。现在的做法是：用相同的细胞数铺板，两天后取上清，提外泌体，用相同体积的裂解液裂解，作WB时上样上相同的体积，结果显示两种细胞外泌体含量不同。但是现在存在的问题是两种细胞增殖速度不同，培养两天取上清后计数，两者的细胞个数大概是3:4，这样的话，细胞个数不同分泌的外泌体数量肯定不同。请问这个思路对吗还是说做WB之前必须要BCA定量上样上相同量的蛋白？

Johnny · 发表于 2016-7-4 18:28:25

理论上你要比较不同细胞分泌的外泌体的量，应该是比较相同的细胞量来源的外泌体的数量

hereissyk · 发表于 2016-7-5 10:47:39

建议跳过比量，直接比效果，量没有什么精确的方法，意义也不是很大。

sldingxiang · 发表于 2016-7-5 15:02:10

Johnny 发表于 2016-7-4 18:28
理论上你要比较不同细胞分泌的外泌体的量，应该是比较相同的细胞量来源的外泌体的数量 ...

是的 Johnny兄我也觉得提外泌体是应该保证细胞量相等，但是细胞转进病毒之后增殖速度跟转病毒之前就不一样了，如果增殖快的早点提增殖慢的晚点提，来保证细胞数量相等，那分泌外泌体的时间又不一样了还是没有可比性

见多识广的Johnny兄，有没有什么建议或者你有没有看到过相似研究的文献？

sldingxiang · 发表于 2016-7-5 15:05:43

hereissyk 发表于 2016-7-5 10:47
建议跳过比量，直接比效果，量没有什么精确的方法，意义也不是很大。

谢谢你的建议。我原本的思路是研究某种基因能否影响外泌体的分泌。。。有看过类似的报道吗？

Johnny · 发表于 2016-7-5 16:42:06

sldingxiang 发表于 2016-7-5 15:02
是的 Johnny兄我也觉得提外泌体是应该保证细胞量相等，但是细胞转进病毒之后增殖速度跟转病毒之前就不 ...

同hereissyk兄，量没有什么精确的方法，实验操作、仪器本身等各方面误差很大，除非你的细胞分泌的外泌体量有好几倍甚至数量级上的差异，倒是可以比较，这时候你收上清时细胞的3:4差异也就忽略不计了

同样，建议直接比作用，找表型，这才是关键。

sldingxiang · 发表于 2016-7-5 16:59:27

Johnny 发表于 2016-7-5 16:42
同hereissyk兄，量没有什么精确的方法，实验操作、仪器本身等各方面误差很大，除非你的细胞分泌的外泌体 ...

嗯谢谢建议。感觉走到了死胡同，是要改变思路了~

hlqp · 发表于 2016-7-5 22:38:56

请问外泌体要怎么测质量

sldingxiang · 发表于 2016-7-6 10:25:55

hlqp 发表于 2016-7-5 22:38
请问外泌体要怎么测质量

没有测质量直接做的WB定量

hlqp · 发表于 2016-7-6 13:03:24

那提取外泌体全部过程是不是最好在无菌条件下呢？重悬外泌体的PBS要过滤过吗？谢谢

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怎么比较不同细胞分泌的外泌体的量？

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