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新手外泌体TEM结果

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发表于 2020-1-3 16:55:46 | 显示全部楼层 |阅读模式
      各位老师和电镜大佬:
            这是小弟超离后的电镜图,不知道是什么原因背景这么模糊,而且好像没有看到外泌体,但是粒径测出来平均在95nm左右,是不是电镜步骤有问题。电镜用的是2%的铀负染1min,120KV的电镜观察

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发表于 2020-1-5 20:33:50 | 显示全部楼层
样本类型? 预处理方法?超离参数?
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 楼主| 发表于 2020-1-6 13:33:39 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2020-1-5 20:33
样本类型? 预处理方法?超离参数?

版主您好,我的样本是NK-92细胞,密度在10*6/ml ,400ml上清 120000g离心70min,在用PBS洗2次,然后用400ul的PBS溶好冻在-80,第二天取10uL做电镜。我BCA测出来蛋白有1mg/ml,有没有可能是密度太大了?
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发表于 2020-1-8 13:51:37 | 显示全部楼层
第一,外泌体最后溶解的时候最好是用水溶解,不用PBS溶解。
第二,放在-20摄氏度保存一个月还是可以测的,-80℃不知道效果如何,从图中看是感觉浓度偏大了些,建议重新离一次外泌体,放在4度或者-20摄氏度保存一周内制备好样品
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