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超离提取血清外泌体的方法

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发表于 2019-3-31 18:45:25 | 显示全部楼层 |阅读模式
想请教大家,超离提人血清外泌体,文献有说15万g过夜离心,也有1万g70min*2,有点蒙圈,请问大家具体怎么处理的呢??另外实验室条件有限,只有38.5ml大超离管离心不到2ml血清,是否会影响得率呢??谢谢!!
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发表于 2019-4-1 07:40:50 来自手机 | 显示全部楼层
试试管子套管子,不保证安全!!
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发表于 2019-4-1 10:10:18 | 显示全部楼层
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大,收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑使用PBS稀释10~20倍  然后再用38.5的管子去离心。  一般10万g 70分钟 是可以的。 但是很难看到沉淀。
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 楼主| 发表于 2019-4-17 17:11:30 | 显示全部楼层
谢谢大神!!我最近用大管子离了一下,发现第一次超离后就有那种白的沉淀,晃动管子的时候也跟着飘起来了,这难道是杂质蛋白?用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢?
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 楼主| 发表于 2019-4-17 17:12:46 | 显示全部楼层
yunxinxu 发表于 2019-4-1 07:40
试试管子套管子,不保证安全!!

哈哈这样的话实验室老师会把我轰出来
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 楼主| 发表于 2019-4-17 17:13:19 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大,收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑 ...

谢谢大神!!我最近用大管子离了一下,发现第一次超离后就有那种白的沉淀,晃动管子的时候也跟着飘起来了,这难道是杂质蛋白?用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢?
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发表于 2019-8-7 14:22:50 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大,收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑 ...

请问大神,我也在做血清外泌体,可是感觉提取的外泌体纯度不好,现在用的10万转3h+2h,应该怎么办哇
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发表于 2019-9-8 13:07:40 | 显示全部楼层
anlinyuan 发表于 2019-4-17 17:11
谢谢大神!!我最近用大管子离了一下,发现第一次超离后就有那种白的沉淀,晃动管子的时候也跟着飘起来了, ...

你好,请问一下你这个问题解决了吗?
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 楼主| 发表于 2019-9-8 22:10:04 | 显示全部楼层
xrhaha 发表于 2019-9-8 13:07
你好,请问一下你这个问题解决了吗?

PBS用滤膜滤一下就可以了
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