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SBI Exo-Quick TC提取血清exo经验与困惑

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发表于 2015-7-7 17:03:39 | 显示全部楼层 |阅读模式
SBI的Exo-Quick有两种,一种就是Exo-Quick,说明书提示用以提取血清exo;还有一种是Exo-Quick TC,用以提取培养基或尿液exo。
我在想,培养基不就是10%FBS+DMEM之类的么,那么我如果用PBS(或DMEM、IMDM)稀释血清,制造一种类似培养基的东西,然后用Exo-Quick TC是否可以提取了呢?


抱着试试看的态度,我选择了Exo-Quick TC。
取100ul小鼠血清(分别为sham和心梗小鼠),用400ul PBS稀释,得500ul mix。加入100ul Exo-Quick TC,此时立即出现浑浊(什么情况?)
Anyway,继续做 。4度静置40min左右,1500g*30min离心,见EP管底部有较多白色沉淀。再用200ul PBS重悬吹打,得清亮、透明混合液。


鉴定不打算做了,直接做表征。观察其对靶细胞是否有作用。
欲知后事如何,且听下回分解。

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发表于 2015-7-7 17:10:54 | 显示全部楼层
立即出现浑浊是因为你稀释的血清里面蛋白和盐离子的成分过高。如果将细胞培养上清浓缩高倍数后用Exo-Quick TC也会出现这种情况

当立即出现浑浊的时候,反复吹打 浑浊能溶解 溶液能变透明吗?
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 楼主| 发表于 2015-7-8 09:06:06 | 显示全部楼层
Johnny 发表于 2015-7-7 17:10
立即出现浑浊是因为你稀释的血清里面蛋白和盐离子的成分过高。如果将细胞培养上清浓缩高倍数后用Exo-Quick  ...

是因为蛋白和盐过高么,之前我倒不知道这个。
吹打后是可以变成透明的,当然不是那种像纯净水一样的透明,但也不是浑浊。
我之前用Millipore超滤的时候,一般都是10ml超滤至1ml左右,其实这个浓缩程度已经很大了,但加入1/5的Exo-Quick TC,并无立即浑浊,当然,我此前用的都是无血清培养基。。。

这次提取没测浓度,我觉得测浓度没啥意义了,肉眼看到的沉淀太明显了,显然应该有不少其他杂志吧。
因为有设置了sham组和心梗组,所以打算先做做现象看。
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发表于 2015-7-8 13:03:10 | 显示全部楼层
惜名 发表于 2015-7-8 09:06
是因为蛋白和盐过高么,之前我倒不知道这个。
吹打后是可以变成透明的,当然不是那种像纯净水一样的透明 ...

嗯嗯,吹打后能变透明就OK

进展不错O(∩_∩)O哈!
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 楼主| 发表于 2015-7-8 15:01:45 | 显示全部楼层
Johnny 发表于 2015-7-8 13:03
嗯嗯,吹打后能变透明就OK

进展不错O(∩_∩)O哈!

如果不能变透明,说明什么问题呢?
是因为杂质太多么?
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发表于 2015-7-8 21:03:25 | 显示全部楼层
惜名 发表于 2015-7-8 15:01
如果不能变透明,说明什么问题呢?
是因为杂质太多么?

不能变透明的话,就提不出来了,因为把蛋白全部沉淀了,整个体系一般都是固体
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发表于 2018-10-19 09:59:42 | 显示全部楼层
Johnny 发表于 2015-7-8 21:03
不能变透明的话,就提不出来了,因为把蛋白全部沉淀了,整个体系一般都是固体 ...

您好,我最近用SBI试剂盒提取外泌体,提取试剂加进去后液体变浑浊,混匀后也不是特别澄清,提取后沉淀都是红色,胶冻状。按照您说的是因为细胞培养上清浓缩倍数太高造成的吗?那一般都多少倍浓缩比较合适呐?我的样品很珍贵,还有补救的办法吗?请赐教,万分感谢。
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发表于 2018-12-10 12:52:22 | 显示全部楼层
想请问最后做出来有成功吗?
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发表于 2019-3-8 17:56:28 | 显示全部楼层
全是杂志,外泌体有,全被99.9%的杂志掩盖了
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发表于 2019-10-28 15:14:08 | 显示全部楼层
后来就没有然后了?
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