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请教关于血浆外泌体提取的问题

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发表于 2016-11-16 09:29:37 | 显示全部楼层 |阅读模式
求助:1、请问用血将提取外泌体的话,提取之前血浆放-80保存会对外泌体有影响吗?
           2、如果用超离的方法提取血浆中的外泌体应该用多少体积呢?
           请各位大神赐教!不胜感激!
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发表于 2017-9-25 20:48:03 | 显示全部楼层
zzycircle 发表于 2017-9-23 20:16
请问可以发一下具体的超离步骤吗?
是否需要0.22的膜滤过一下。谢谢~

全血1000g离心10分钟,取血浆,然后1000g再离心10分钟去除血细胞。血浆用particle-free PBS稀释后离心,10000g离心30分钟去除micro-particles(也有的protocol使用0.22um滤膜去除micro-particles),上清转移至超速离心管,100000g离心2小时。沉淀(基本上看不见)用PBS重悬,NTA检测浓度和直径。
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发表于 2017-10-31 09:46:13 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-17 23:21
增加起始的exosome量,如果用Trizol试剂提取,沉淀时放在-20过夜,同时加入glycogen共沉淀。RNAseq,如果 ...

谢谢前辈回答。那么glycogen应该加多少呢?
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发表于 2016-11-16 10:35:40 | 显示全部楼层
1. -80保存对外泌体没有太大的影响,注意避免反复冻融
2. It depends on your purpose, a few hundred microliter is enough for WB or RT-PCR detection of microRNA
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 楼主| 发表于 2016-11-16 14:54:45 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-16 10:35
1. -80保存对外泌体没有太大的影响,注意避免反复冻融
2. It depends on your purpose, a few hundred micr ...

好的!十分感谢!
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发表于 2017-3-16 22:40:00 | 显示全部楼层
基本没有什么影响,做过对比分析
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发表于 2017-3-22 08:08:02 | 显示全部楼层
想问一下血浆是加过抗凝的么,没加过抗凝的血浆可以提外泌体么
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 楼主| 发表于 2017-3-24 09:46:35 | 显示全部楼层
八戒在五湖 发表于 2017-3-22 08:08
想问一下血浆是加过抗凝的么,没加过抗凝的血浆可以提外泌体么

根据试剂盒的要求,血浆提外泌体前加了凝血酶素D
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发表于 2017-3-27 10:23:58 | 显示全部楼层
丫丫 发表于 2017-3-24 09:46
根据试剂盒的要求,血浆提外泌体前加了凝血酶素D

那就是没加抗凝的血浆也是可以提外泌体的?请问有什么合适的试剂盒可以推荐吗
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 楼主| 发表于 2017-3-29 09:53:29 | 显示全部楼层
八戒在五湖 发表于 2017-3-27 10:23
那就是没加抗凝的血浆也是可以提外泌体的?请问有什么合适的试剂盒可以推荐吗 ...

我用的是SBI的,其他的还没用过
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发表于 2017-4-23 09:59:02 | 显示全部楼层
提取效果怎么样呀,我的血浆没加抗凝,都凝固了,不知道能不能提
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 楼主| 发表于 2017-5-2 17:09:14 | 显示全部楼层
八戒在五湖 发表于 2017-4-23 09:59
提取效果怎么样呀,我的血浆没加抗凝,都凝固了,不知道能不能提

都凝固了还怎么提?我也不知道哎,没遇到过这种情况。用试剂盒提的还可以吧。
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