外泌体BCA法测蛋白浓度的时候需要裂解吗？

免疫小子 · 发表于 2016-6-14 21:27:13

现在看到好多老师测外泌体蛋白浓度的时候都裂解了EXO，但是我在文献上也有看到有些研究并没有裂解外泌体，而是直接测的表面蛋白，我想问一下这到底要不要裂解啊，两种方法有什么区别吗？还有就是一般10的6次方个细胞能得到多少外泌体呀？

DBLB · 发表于 2019-10-11 19:13:12

中义发表于 2016-9-23 17:17
直接测和裂解后测都可以，我对比过一次。

请问加裂解液会和BCA试剂盒反应吗。我试过自己配的RIPA和碧云天的RIPA，但是加进去之后RIPA会和BCA试剂盒底物反应。

JKF · 发表于 2018-1-23 21:30:37

zhixiarensheng 发表于 2017-4-27 20:13
不裂解直接加上样缓冲液电泳吗？

加缓冲液直接煮沸变性上样

胡杨 · 发表于 2017-11-24 10:06:09

Dr.zhs 发表于 2017-9-21 12:06
请问如果裂解的话应该加多少裂解液呢，加多了裂解液那蛋白的浓度会不会很低啊？还有，请问有没有不裂解的 ...

麻烦问一下，你最后是怎么做的呢？有裂解吗？

Dr.zhs · 发表于 2017-9-21 12:06:19

中义发表于 2017-3-17 00:06
支持楼上的，不过我是按照细胞裂解后转速离心取上清的。不裂解也可以，建议不裂解 ...

请问如果裂解的话应该加多少裂解液呢，加多了裂解液那蛋白的浓度会不会很低啊？还有，请问有没有不裂解的文献啊，能否推荐一篇？谢谢

yxyyjs · 发表于 2017-6-28 12:37:10

同问，还是搞不清楚到底要不要裂解

18940258208 · 发表于 2017-5-30 18:34:51

学习了

18940258208 · 发表于 2017-5-30 17:04:30

可是我用的是凯杰的kit提取的exosome，没有裂解，做出来的6个泳道的标本是全部连成一条线的

zhixiarensheng · 发表于 2017-4-27 20:13:19

中义发表于 2017-3-17 00:06
支持楼上的，不过我是按照细胞裂解后转速离心取上清的。不裂解也可以，建议不裂解 ...

不裂解直接加上样缓冲液电泳吗？

中义 · 发表于 2017-3-17 00:06:46

LarryYang 发表于 2017-1-12 00:46
那请问下，裂解后的还要离心取上清吗，像细胞一样？还是说不用离心？

支持楼上的，不过我是按照细胞裂解后转速离心取上清的。不裂解也可以，建议不裂解

exosun · 发表于 2017-2-21 23:39:25

LarryYang 发表于 2017-1-12 00:46
那请问下，裂解后的还要离心取上清吗，像细胞一样？还是说不用离心？

不用，因为无论是kit或超离后得到的外泌体已经把较大的杂质都去除了，你小转速离心也离不出什么的。

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