求助，从exosome提出RNA后的qPCR.

木瓜31

muyujun123 发表于 2015-1-8 20:03
内参？用的u6吗？但是我看文献里说，exosome里面的mirna是要用外参的啊，exosome里有u6吗？ ...

我也想了解这方面的知识，可以分享下相关文献吗？谢谢哦

木瓜31

大家外泌体miRNA定量做得如何呢？我之前根据文献选了一个miRNA(miR-16)作为内参，但是似乎不太理想。。又在提取RNA时加入外参，但样本之间外参PCR的CT值并不十分接近。这是说明样本间RNA提取效率、RT-PCR的操作有问题，一致性差呢？还是无需在意，直接用(CT目的基因-CT外参）进行相对定量呢？个人觉得如果RT-PCR能够保证一致性较可（反转录前加入另一个spike in)而RNA提取效率不一致，即使样本RNA有损失，那是不是可以认为各种RNA均减少（外参与目的基因一起减少）？？求交流及赐教~

木瓜31

wanghx_85 发表于 2015-6-12 08:52
我问过相关的技术支持，现在做exo的miR没有公认的内参（也就是说U6是不行滴），设置外参的目的是为了说明 ...

请问你现在如何定量呢？外参吗？