求助，从exosome提出RNA后的qPCR.

huan1989111007

求助各位，由于标本有限，从exosome提出的RNA只有10ng左右，想问下你们做逆转录时用的是哪一家的试剂盒？谢谢各位兄弟姐妹！谢谢！

huan1989111007

惜名 发表于 2015-1-2 14:44
你是做miRNA吧？我用天根的逆转录kit，跑出来循环数较高，25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲，QIAN ...

thanks. 确实是miRNA. 看过相应文献有用Qiangen的，还有Takara。第一个如您所说，贵，第二个公司逆转录的停产了。不过谢谢分享，谢谢

huan1989111007

惜名 发表于 2015-1-2 14:44
你是做miRNA吧？我用天根的逆转录kit，跑出来循环数较高，25-30个吧。扩增曲线蛮好的~据另一个战友讲，QIAN ...

thanks. 确实是miRNA. 看过相应文献有用Qiangen的，还有Takara。第一个如您所说，贵，第二个公司逆转录的停产了。不过谢谢分享，谢谢

huan1989111007

muyujun123 发表于 2015-1-14 17:05
因为exosome中u6的含量不太稳定，所以一般人为的加入外参来定量。我也不是很清楚，正在摸索。我觉得可能 ...

  可以贴出文献么？U6确实不太稳定表达。求助，相互探索。

huan1989111007

惜名 发表于 2015-9-7 10:06
用过  但是效果并不好。。。
引物是公司帮忙设计的   我没设计过引物

不好是怎样的？这方面太坑...

huan1989111007

kadak007 发表于 2015-9-7 10:11
唉，感觉内心很忐忑呀，先硬着头皮试试吧

最主要的是提取exosome的量，其次是逆转录的试剂盒。祝好运...

huan1989111007

kadak007 发表于 2015-9-7 10:11
唉，感觉内心很忐忑呀，先硬着头皮试试吧

最主要的是提取exosome的量，其次是逆转录的试剂盒。祝好运...

huan1989111007

kadak007 发表于 2015-9-7 09:53
惜名版主，你有没有用过天根的miRNA荧光定量检测试剂盒？想请教下 上游引物设计问题...... ...

miRNA 一般有通用引物和特异性引物的。通用引物一般试剂盒中有，特异性引物自己购买即可。差别不大。