求助，从exosome提出RNA后的qPCR.

huan1989111007 · 发表于 2014-12-30 16:07:57

求助各位，由于标本有限，从exosome提出的RNA只有10ng左右，想问下你们做逆转录时用的是哪一家的试剂盒？谢谢各位兄弟姐妹！谢谢！

wanghx_85 · 发表于 2015-6-12 08:55:21

这是我昨天收到的技术支持发给我的文件，关于SBI研究外泌体miR的一些相关设计，感兴趣的可以看一下，我还没来得及看

，有兴趣大家一起交流下~

muyujun123 · 发表于 2015-1-14 17:05:45

惜名发表于 2015-1-9 09:22
你有相关文献么？可以贴出来分享一下~我对这方面内容目前了解的不多，就以U6作为内参的，是可以跑出来的 ...

因为exosome中u6的含量不太稳定，所以一般人为的加入外参来定量。我也不是很清楚，正在摸索。我觉得可能是加入标准品进行绝对定量吧

zhaozhi · 发表于 2021-2-1 17:39:57

遇到瓶颈来看看

空调酱 · 发表于 2018-12-24 14:44:24

fengshilou 发表于 2015-11-18 09:26
我们目前也遇到了这种情况，就是每次PCR结果相差很大，标本和环境都换了，重复还是每次都不一致。不知道 ...

想问下这个问题解决没。我也是这样

acmdy1995 · 发表于 2018-7-26 21:23:08

惜名发表于 2015-1-9 09:22
你有相关文献么？可以贴出来分享一下~我对这方面内容目前了解的不多，就以U6作为内参的，是可以跑出来的 ...

你有没有测试过，总RNA一样的情况下，U6表达量是否恒定？

奥比克 · 发表于 2018-6-2 17:17:14

胡杨发表于 2018-4-19 10:37
你好，你10ng的RNA做出来了吗？因为我提取的RNA浓度也特别的少，你做的时候这个量少不少？ ...

我也是提出来特别少，你是怎么确定量的，我是用nanodrop2000，测的38ng/ul

奥比克 · 发表于 2018-6-2 17:11:11

Johnny 发表于 2015-4-29 10:56
可以

请问你提出来了吗，怎么验证的，量是如何确定的。。。。

geyulong · 发表于 2018-5-24 15:18:01

您好，请问外泌体中的miRNA是使用什么方法提取的，谢谢了

胡杨 · 发表于 2018-4-19 10:37:12

你好，你10ng的RNA做出来了吗？因为我提取的RNA浓度也特别的少，你做的时候这个量少不少？

zhouxinyu1995 · 发表于 2018-4-4 10:19:08

请问下大家我是用的10ml上清，用50kd的超滤浓缩管浓缩到500ul，并且用SBI的外泌体提取试剂盒提的外泌体。过夜后可见很多杂蛋白，用trizol提RNA后，用20ul无酶水溶解，总RNA浓度为50ng／ul，可得到几乎1ug的总RNA，OD值为1.4-1.5左右。请问大家这个RNA会不会太多了，可信吗？

waimiti · 发表于 2017-12-25 14:58:02

木瓜31 发表于 2015-9-29 23:58
大家外泌体miRNA定量做得如何呢？我之前根据文献选了一个miRNA(miR-16)作为内参，但是似乎不太理想。。又在 ...

请教一下您，您最后的问题解决没？我现在也有同样的困惑，谢谢

旋转的尾音 · 发表于 2016-9-4 11:28:28

惜名发表于 2016-9-3 16:06
我找的biotnt，这家公司在上海貌似做了挺久的，我在他们那里做过好几次，感觉还行，哈哈 ...

有家叫启因的公司，免费给设计合成，免费qPCR验证，我先找他们试试~
之前师兄说生工也不错的

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求助，从exosome提出RNA后的qPCR.

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