大家关于试剂盒的几点疑问和澄清

seallin

hzangs 发表于 2015-10-28 11:15
对不起刚刚发出的帖子  我感觉有点不妥当，所以对一些数值进行修正。考虑到A549平铺在培养皿中是50um，球 ...

你的例子还有数值很有道理，请问你60ml培养液最后得到多少微克蛋白？另外马尔文的仪器在测试的时候，一旦浓度超过1E9就不线性了，而你的样品测到了1E11，是样品稀释了至少100倍吧？

seallin

Izon 发表于 2015-10-28 15:30
你的这个数据是颗粒浓度，不是粒径吧。

关于颗粒浓度，手上正好有几张图，大家可以比较一下：

测试参数的不同，确实会有所差别，不过貌似不会有数量级上的差别吧

seallin

Izon 发表于 2015-10-28 15:59
结果都是用100nm+200nm标准样品1：1配好来测的。应该了解一下这个“浓度”是怎么“测”出来的，跟什么有关 ...

我知道，和斯托克斯方程有关，系数不一样，最后的浓度就不一样啦

seallin

Izon 发表于 2015-10-28 16:42
还有光源，photo detector, 颗粒对光的scattering，大颗粒的影响，溶液离子强度等。反正要是 ...

和文献对比可能会出现参数不同的问题，但是不至于差好几个数量级。但是自己的横向对比因为参数一致，所以这点影响可以忽略不计

seallin

Izon 发表于 2015-10-28 16:54
有机会的话，你稀释一个浓度梯度测测看，看能不能给你一个意外的结果。

不过目前国内关注外泌体准确定量 ...

对，很有道理，不过方法也是为应用服务的

seallin

hzangs 发表于 2015-10-28 17:48
这个涉及到了我们细胞系的特性和后面发表时候的相关数据，所以具体细节不便透露，还请见谅。 因为不是用 ...

理解，不知除了Lobb那篇，还有哪些文献是用粒子数/蛋白量这个指标的，可否推荐几篇文献，非常感谢

seallin

hzangs 发表于 2015-10-28 20:43
你要是有更好的反应exosomes样品中exosomes纯度的指标 也行 呵呵

我也没有其他指标，文献看的也不多，因为目前我只发现lobb那篇文献提出了那个指标，所以想请教一下你，是否还有其他文献也用了这个指标。我只是虚心的请教，希望你别介意。

seallin

hzangs 发表于 2015-10-29 12:02
毕竟我们两个人的数据都没办法秀到坛子里。 确实想学习研究一下楼主的优化后的沉淀法的protocol，看看优 ...

恩，这是应该做的。对了，粒子数/蛋白量这个指标是不是只有Lobb用过，我承认这是个好方法，是否还有其他文献，你貌似一直在避开回答这个问题。谢谢~~

seallin

hzangs 发表于 2015-10-29 13:42
你一直在强调自己的二次沉淀法分到的exosomes样品很纯， 也承认粒子数/蛋白量是个好方法。你有没有试着去 ...

算了，到此为止，我

seallin

guomengzhou 发表于 2015-12-6 21:18
感谢楼楼提供的方法，我也在做60-70kda的条带。想请问下重溶后再加kit的量是多少了？譬如用50ul的PBS重溶 ...

比例按照提供的体积比即可