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咨询血浆外泌体浓度是否正常范围?

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发表于 2021-3-22 18:17:50 | 显示全部楼层 |阅读模式
我用超速离心法提取血浆外泌体,取3ml人的血浆,超速离心后100ulPBS重悬,1:1加入RIPA,BCA测蛋白浓度,5ug/ul左右,不知道是否正常。
谢谢解答
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发表于 2021-3-24 09:34:13 | 显示全部楼层
比较正常。
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 楼主| 发表于 2021-3-24 11:58:34 | 显示全部楼层
非常感谢
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发表于 2021-3-24 16:02:42 | 显示全部楼层
我用不同超离时间提出来浓度差异比较大,可以问一下你的超离时间和速度吗?谢谢
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 楼主| 发表于 2021-3-25 08:17:29 | 显示全部楼层
不止不行 发表于 2021-3-24 16:02
我用不同超离时间提出来浓度差异比较大,可以问一下你的超离时间和速度吗?谢谢 ...

我用的是两次110000g 70分钟
我觉得浓度差异较大是不是和最后沉淀重悬的PBS量有关?
我的离心管只有7ml,最后我会留下2mm左右液体,没敢完全吸走......
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发表于 2021-3-30 17:11:54 | 显示全部楼层
关节科小大夫 发表于 2021-3-25 08:17
我用的是两次110000g 70分钟
我觉得浓度差异较大是不是和最后沉淀重悬的PBS量有关?
我的离心管只有7ml, ...

我每次也会残留一点点,重悬的PBS都是差不多的,但我是35ml的大管子,感觉2h离心效果不是很好,我尝试过夜离心,得到的量就会多很多,不知道你们尝试过过个离心没?你们离心的时候会不会用PBS稀释呢,不稀释的话稠度那么高不好离下来吧
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发表于 2023-4-13 20:10:15 | 显示全部楼层
您好,请教一下,血浆提取外泌体,需要特殊处理吗?可以分享下前期的处理吗?
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发表于 2024-1-24 11:45:32 | 显示全部楼层
stonesli 发表于 2023-4-13 20:10
您好,请教一下,血浆提取外泌体,需要特殊处理吗?可以分享下前期的处理吗? ...

1) 用采血针和 EDTA 抗凝管抽取全血,轻柔上下颠倒混匀后室温或者
4°C 保存,并在 1 小时内进行下一步处理;
2) 4°C 条件下,使用吊桶式转头 1900 g 离心 10 min,小心吸取上清
即为血浆,最后 500 μl 左右丢弃。得到的血浆再次离心,条件为 4°
C,3000 g,15 min,小心吸出血浆,注意不要碰到底部和侧面的
沉淀物;
3) 将血浆冻存于-80°C;
提示:送样量最好 4 ml 以上(分离 4 ml 血浆约需要 8-10 ml 全血)。
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