超离提取血清外泌体的方法

anlinyuan · 发表于 2019-3-31 18:45:25

想请教大家，超离提人血清外泌体，文献有说15万g过夜离心，也有1万g70min*2，有点蒙圈，请问大家具体怎么处理的呢？？另外实验室条件有限，只有38.5ml大超离管离心不到2ml血清，是否会影响得率呢？？谢谢！！

anlinyuan · 发表于 2019-4-17 17:11:30

谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了，这难道是杂质蛋白？用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢？

anlinyuan · 发表于 2019-4-17 17:12:46

yunxinxu 发表于 2019-4-1 07:40
试试管子套管子，不保证安全！！

哈哈这样的话实验室老师会把我轰出来

anlinyuan · 发表于 2019-4-17 17:13:19

hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。另外血清可以考虑 ...

谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了，这难道是杂质蛋白？用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢？

anlinyuan · 发表于 2019-9-8 22:10:04

xrhaha 发表于 2019-9-8 13:07
你好，请问一下你这个问题解决了吗？

PBS用滤膜滤一下就可以了

anlinyuan · 发表于 2020-1-13 20:45:53

xrhaha 发表于 2020-1-11 10:46
感谢回复！时隔这么久，不知道你还在做外泌体吗？想请教一下是否离过MCF-7细胞的外泌体？我用100mL培基离 ...

嗯的我还在做，那你离完之后有没有测过蛋白浓度，有没有做过WB呢，其实可能真的啥也看不见，另外你可以尝试一下第一次离心完多留点儿底儿试试，外泌体可以用PBS重悬直接冻-80，也可以用RIPA裂解液重悬用于以后做WB，如果做细胞实验的话外泌体最好用新鲜的

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