有囊泡相关技术问题请在该贴留言！

hzangs

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hzangs最近几个月比较忙，没时间逐一阅读大家发的帖子。 有什么问题的话可以在这个帖子留言。如果是我之前没有总结过的问题，我看到后会回复。

hzangs

奥比克 发表于 2018-7-7 20:11
想知道有没有PKH67跟踪外泌体的Protocol，谢谢hzangs大神

这个没有。。。   大概的方法在论坛里之前就讨论过。 一般是先和纯化好的外泌体共孵育，然后再重新从体系中纯化外泌体，在于你的受体细胞共孵育。    里面没什么太多的难度，基本没有整理过protocol

hzangs

hjj 发表于 2018-7-9 15:08
您好，想请问一下，外泌体载药的话，浓度怎么确定呢？老师能推荐一些外泌体载药的文献吗？？ ...

如果这个浓度能查出来，你的工作量就没多少了。 载药浓度不同的药、不同的来源的外泌体、不同的负载方法都不一样。 这个需要你自己去读十几篇paper  然后好好规划一下，设置不同的梯度 然后寻找一个合适浓度。

hzangs

lictic 发表于 2018-7-9 21:49
请问是否每次提外泌体都需要测浓度？同种细胞系每次提取的外泌体蛋白量变化大吗？能否通过毫升数、皿数进行 ...

每次测浓度。

hzangs

yunyu 发表于 2018-7-10 09:16
hzangs老师，我们在做5%，10%，20%，40%的OptiPrep梯度，离心100000*18h，但做出来杂ALIX带很弥散，在每层 ...

没有试过optiprep，  不建议以wb的结果来评判实验的成败。 ALIX这种蛋白只是在外泌体里富集，并非只存在于外泌体中。 以电镜结果为准~~

hzangs

yazisummer 发表于 2018-7-11 10:29
hzangs大神!
我用原代培养的细胞，无FBS培养基饥饿48小时后，收取上清，4度存放了两天。20，000g 4度离心20 ...

强调好多遍了……    这种问题我真不想再回答了…… 最后一次……

原代细胞本来分泌量就低，所以起始培养细胞量要大，起始体积至少要按百毫升算，100没有就200。   超离结束 上清不要倒， 吸走，底部留一点培液。  最好用水平转，不要用角转。  看不到沉淀没关系，只要检测有蛋白浓度  跑wb有条带  电镜有结构  NTA符合就行了。

hzangs

Megan 发表于 2018-7-17 15:15
大神，想请问下外泌体提取microRNA的具体protocol，后期荧光定量PCR用什么内参比较好操作啊 ...

论坛和公众号里很多。自己找。 不再赘述

hzangs

pfdsj 发表于 2018-7-18 17:42
您在初识外泌五，有提到抽提外泌体用TAKARA的9094，我也用了，之前咨询过技术，他们回复得到水相之后按照说 ...

说明书里是沉淀DNA的。 咱们是要抽提RNA，能一样么亲    请按照我的方法来！

hzangs

nixiao 发表于 2018-9-12 20:38
您好，我是细胞上清提外泌体，想看两个细胞共培养后，有没有特殊因子的上调，除了做外泌体的蛋白组学还能不 ...

你只是想看分泌组有没有变化。  直接沉淀所有的胞外蛋白就可以。 如果特异性的想看外泌体中是否有因子变化 才需要做外泌体的蛋白质组学。

hzangs

z6234206 发表于 2018-11-9 20:36
请问，提取完外泌体后，需要用多少浓度处理细胞？如何处理，是直接将外泌体添加到待处理的细胞上清液中么 ...

不同细胞 不同功能研究不一样。  你需要自己去摸索