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hzangs

future1994 发表于 2020-12-13 10:52
您好hzangs大神，最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体，用的贝克曼的水平转子，第一遍超速离心后可以看 ...

密度梯度离心，需要回收特定密度区段…   未必是在管底，这和你配置的密度梯度有关…  详情 查阅thery 在2006年发表的protocol

future1994

您好hzangs大神，最近尝试用梯度密度离心提取血浆中外泌体，用的贝克曼的水平转子，第一遍超速离心后可以看到管底有胶冻样沉淀，我官底就留了大约300ul左右，加上PBS重悬后第二遍基本看不见了，这一步上清需要去除干净吗？
我之前两部超离后上清都送的很干净，去做了电镜，什么都没找到，请问应该先做什么NTA还是TEM呢

hzangs

liulin625 发表于 2020-10-10 11:51
最近准备从血浆中提取外泌体，有qEv和蔗糖垫两种备选方案，不知版主有什么推荐，是否可以分享下提取方法， ...

目前血浆中提取细胞外囊泡的主流做法 是密度梯度离心（蔗糖垫 是简化的密度梯度离心策略）

liulin625

最近准备从血浆中提取外泌体，有qEv和蔗糖垫两种备选方案，不知版主有什么推荐，是否可以分享下提取方法，蔗糖垫一定要重水配置么，有人说PBS也可以，求大家指导，谢谢

ypf123

我想问一下，什么细胞提取的外泌体的量比较多

hollychao

hzangs 发表于 2020-6-11 15:24
抱歉，这个真没做过。 但是按照你的描述来说， 没什么问题，你可以按照细胞质中蛋白的 ELISA 方法 来操作 ...

好哒~谢谢大神~~

hzangs

hollychao 发表于 2020-6-9 20:44
请教hzangs大神~做ELISA测外泌体内的蛋白之前，是样本（外泌体悬浮液）和RIPA=1：1来裂解外泌体的吗的吗？ ...

抱歉，这个真没做过。 但是按照你的描述来说， 没什么问题，你可以按照细胞质中蛋白的 ELISA 方法 来操作
。

hollychao

请教hzangs大神~做ELISA测外泌体内的蛋白之前，是样本（外泌体悬浮液）和RIPA=1：1来裂解外泌体的吗的吗？裂解后需不需要离心取上清液呢？非常感谢~

仙逆清水

hzangs 发表于 2020-1-21 10:16
如果是细胞系的话  还好。 再收一次外泌体，测qPCR 能部分说明问题。  如果是人样本的话   那就不好办了 ...

老师 你好  我用的是人类尿液样本，那两个样本用完后，现在只能用别的样本来代替，不知道这样行不行

hzangs

changlong 发表于 2020-2-1 17:27
冻存3-5年的血清样本提外泌体的效果怎么样呢，谢谢

只要没反复冻融过， 基本不会有什么问题。