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exo uptake实验,如何去除残余染料

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发表于 2015-7-2 09:51:34 | 显示全部楼层 |阅读模式
各位大侠,最近要做exo 摄取实验,首先要用PKH67标记exosome,然后去除多余染料。文献报道去除残余染料,可用超速离心的方法,可我们没有超速离心机。
还有一篇文章,用的是7kDa的脱盐柱,可是脱盐柱没用过啊。
做过该实验的大侠,还有其他方法吗?
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发表于 2015-7-2 22:19:00 | 显示全部楼层
Izon 公司目前有一款凝胶排阻柱子   可以用来分离exosome。我感觉你可以尝试用他们家的柱子做一次纯化试一试,相当于从样品里回收exosome,也许可以达到你去除多余燃染料的目的。
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 楼主| 发表于 2015-7-3 16:18:24 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2015-7-2 22:19
Izon 公司目前有一款凝胶排阻柱子   可以用来分离exosome。我感觉你可以尝试用他们家的柱子做一次纯化试一 ...

好的,谢谢您的建议。
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发表于 2015-7-2 10:03:46 | 显示全部楼层
一篇JCI用0.5%的BSA中和染色结束的混合液,这个步骤就是去除多余染料的么?
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 楼主| 发表于 2015-7-2 10:08:42 | 显示全部楼层
惜名 发表于 2015-7-2 10:03
一篇JCI用0.5%的BSA中和染色结束的混合液,这个步骤就是去除多余染料的么?

嗯,文献中说PKH-67染完是要用BSA中和,但是还说要超速离心,不知道BSA是否能彻底去除残余染料?
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发表于 2015-7-2 10:19:43 | 显示全部楼层
wenzhouzsl 发表于 2015-7-2 10:08
嗯,文献中说PKH-67染完是要用BSA中和,但是还说要超速离心,不知道BSA是否能彻底去除残余染料? ...

超速离心当然要的,这就是重新提取exo的过程啊。
至于是否能彻底去除,我觉得应该是可以的吧。我做过3次,都是用这个方法,出来的免疫荧光图还蛮好的。
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 楼主| 发表于 2015-7-2 14:05:16 | 显示全部楼层
惜名 发表于 2015-7-2 10:19
超速离心当然要的,这就是重新提取exo的过程啊。
至于是否能彻底去除,我觉得应该是可以的吧。我做过3次 ...

谢谢您。
我们学校这里没有超速离心机,现在只能用脱盐柱了。不知道效果如何?
超离应该还是最经典的方法。
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发表于 2015-7-4 14:01:39 | 显示全部楼层
要彻底去除PKH67需要蔗糖密度离心,因为PKH会自发形成胶束。
用Exo-quick来除可能也可以,但也要若干次,而且暂无文献支持
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发表于 2015-7-9 09:28:00 | 显示全部楼层
我也是用Exo-Quick重新提取一次,可以加个染料组的阳性对照,看还可以看出摄取的效果的
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发表于 2015-7-22 14:42:05 | 显示全部楼层
马克,感觉要用
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