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楼主: hzangs
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 楼主| 发表于 2017-3-15 17:29:38 | 显示全部楼层
malingran 发表于 2017-3-15 17:21
还需要用PFA固定么?楼主

不需要
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 楼主| 发表于 2017-4-12 09:58:30 | 显示全部楼层
afra 发表于 2017-4-12 09:52
请问大神,这个磷钨酸负染的原理是什么?还有外泌体固定一下电镜片子可以保存久一些?谢谢 ...

负染原理这种东西,百度一下全屏都是。这个还请自己查吧。
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 楼主| 发表于 2017-5-2 14:13:53 | 显示全部楼层
sunshineZY 发表于 2017-5-1 21:13
求问大神,用磷钨酸复染可以吗?与醋酸双氧铀复染有什么区别,哪个更好一些? ...

两种染料都可以。
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 楼主| 发表于 2017-5-3 14:57:52 | 显示全部楼层
sunshineZY 发表于 2017-5-3 14:54
刚刚做的磷钨酸复染外泌体电镜,没有看到大神这样的外泌体。也不知道自己的是不是,问题出在哪里,想请大神 ...

很可能是因为外泌体样品就没有准备好。 提取的外泌体样品可能就没有几个外泌体
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 楼主| 发表于 2017-5-3 18:01:16 | 显示全部楼层
sunshineZY 发表于 2017-5-3 16:21
刚一直没有上传成功图片,现在请您看看这几张。是染色问题还是没有外泌体? ...

不是很清楚你拍成这样的原因。降低染料的浓度试试吧。   不过感觉像是外泌体样品可能就不太好。。。
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 楼主| 发表于 2017-6-5 16:41:21 | 显示全部楼层
kerstin_yang 发表于 2017-6-5 16:37
请教版主,怎样才叫充分吹打呢?这个又不像吹细胞,能看得到沉淀被吹没了。不知道外泌体可以涡旋振荡一下 ...

吹打到看不到任何不溶物即可。  我是用吸泵吸掉上清,不是倒掉。
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 楼主| 发表于 2017-7-5 10:18:56 | 显示全部楼层
栾珍珠 发表于 2017-7-4 17:32
请问大神,25cm是直径还是半径还是面积?

写错了   15cm的培养皿。  直径15cm
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 楼主| 发表于 2017-7-11 15:54:01 | 显示全部楼层
cherylsun 发表于 2017-7-11 15:33
请问醋酸双氧铀是什么比例,PH值有要求吗?

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 楼主| 发表于 2018-5-22 09:58:45 | 显示全部楼层
阿赵 发表于 2018-5-21 19:48
老师,看的文献里竟然还要用多聚甲醛固定,是不是因为外泌体的来源不同呢?之后还要孵育抗体。好多步骤,打 ...

确实有这么做的。 有人说多聚甲醛固定一下效果好。其实我认为,只要你的样品外泌体颗粒足够多,样品足够干净,随便负染一下上机打 就能有不错的结果。
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 楼主| 发表于 2018-5-27 20:39:31 | 显示全部楼层
pudding 发表于 2018-5-22 16:57
外泌体有没有测过浓度?我都是BCA法测的浓度,但是做电镜时不知应该稀释到多少浓度合适
...

超离的话,没必要稀释。试剂盒的话考虑稀释到  最多几微克每微升  吧
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