我的电镜图片

hzangs

SHANKUN 发表于 2015-12-4 22:57
超速离心大概的步骤是什么啊。用多少g呢？

2000g 10min 取上清
10000g 30min 取上清

100000g 90min 取沉淀
PBS洗一次
100000g 90min 取沉淀

hzangs

子非鱼 发表于 2015-12-14 11:56
简洁有力，赞！
hzangs大神，请教一个问题，你提取细胞上清外泌体前，细胞是用无血清培养基培养的？还是 ...

我是过夜超离血清制作exosome-free FBS，然后用这个FBS配培液养细胞。  具体的流程 可以参考我之前的帖子

hzangs

修行医者 发表于 2015-12-16 10:16
大神，没有nanosight，有什么替代方法可以测量size和浓度啊

size 没办法代替。  浓度 可以考虑用蛋白量 来反映浓度，别的 还真没有太好的方法。

hzangs

awakensyy 发表于 2016-3-28 19:29
醋酸双氧铀

  谢谢姑娘

hzangs

xinyi717 发表于 2016-3-28 20:33
请问一下 pbs 是买的公司的吗，感觉自己配的1xpbs 会有杂质呢，感觉影响观察~谢谢 ...

自己配的。  你要感觉有杂质   就过一下0.22的滤器。

hzangs

微泡biomarker 发表于 2016-4-18 09:28
问一下 大家 在制样过程中都不需要稀释吗，我之前的电镜下 看到了 好多盐颗粒， 电竞老师说需要稀释一下呢 ...

我是超速离心分离得到的样品。  没有稀释~

hzangs

微泡biomarker 发表于 2016-4-18 14:09
那问一下 在电镜下会看到 盐颗粒吗 ，我的 总是背景不干净呢？

我的电镜结果里 没有看到盐颗粒。你看到的盐颗粒   可能是因为铜网沉积的时候 PBS太多了，一干燥 就出颗粒了。  或者是染料里面有盐颗粒。

hzangs

zyjjxb 发表于 2016-4-20 22:22
用kit的怎么处理，方法一样吗

沉淀kit的话   有朋友试过一样的处理方法。  有的时候是可以的。 但是一些杂蛋白量太大的   往往会由于张力将铜网拉扯破碎。

hzangs

allen123 发表于 2016-4-24 12:26
你好，请问外泌体做电镜上样前需要固定吗？
我们是SBI试剂沉淀外泌体后重悬，稀释后直接10ul上样，1min,滤 ...

不需要固定。

hzangs

hengheng37 发表于 2016-6-14 16:37
大神你好！我想问一下在制作投射电镜样本之前，外泌体需要用固定液固定吗 ...

我这个是做的透射电镜 负染， 没有固定。