我的电镜图片

hzangs

大家好，我是johnny的舍友。上次交流我说给大家展示一下自己的电镜图，所以现在贴一下给大家看~
这张看上去有点模糊，可能是放大倍数的关系…   基本上还是比较接近典型的形状。 我也有大个头的，就像第二个图，但大部分都是100nm一下的。
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制样：
40ml 培液超速离心分离得到的外泌体，重悬于20-30ul PBS中。
吸取样品10ul 滴加于铜网上沉淀1min，滤纸吸去浮液，
吸取2%的醋酸双氧铀10ul滴加于铜网上沉淀1min，滤纸吸去浮液，
常温干燥数分钟。上机

80kv-120kv 成像

      

hzangs

effiezhang66 发表于 2015-4-23 11:30
好赞，求TEM制样过程，大神！！！！

exosomes样品10ul 铜网上沉淀1分钟，吸水纸吸去多余液体；负染1分钟，吸水纸吸去多余液体。上机 。
应该是80kv电压。

ps：@johnny 我看了一下，我真的是80Kv打的电镜

hzangs

effiezhang66 发表于 2015-4-23 11:40
这样的样本可以储存吗？因为是在别的单位约电镜的

我打过4°保存几天的样品。 这样的样品 打出来的exosomes 容易抱团，但是还能凑合用，能挑到可以上figure的。

hzangs

effiezhang66 发表于 2015-4-23 11:49
大神，求问10ul的重悬液是PBS吗？

是的。 我将大概2000万 tumor cell 分泌的exosomes 用30ul PBS 充分重悬的。

hzangs

微泡biomarker 发表于 2015-4-23 21:34
问一下 负染的 染料是什么啊

染料是一种 铀盐，具体是硫酸铀还是醋酸铀  我记不清了… 以后对事儿了，我去我们院的电镜室再问问吧

hzangs

大琳宝儿 发表于 2015-4-28 13:23
我用PBS重新混悬，沉淀不太溶解啊~需要超声？ 不知道大家是不是也这样 嘿嘿 ...

可以反复多吹打一段时间。实在不溶解的可以通过离心去除掉。我没有超声处理过

hzangs

kadak007 发表于 2015-4-28 18:50
请问下，2000万的细胞是个怎样的概念：25cm规格的培养瓶多少瓶呢？还是用75cm规格的？
谢谢~ ...

我用的细胞    25cm培养皿  一个长满基本上是1000w细胞。

hzangs

微泡biomarker 发表于 2015-4-23 21:34
问一下 负染的 染料是什么啊

电镜室老师做的。 记着好像使用的是 铀盐

hzangs

jp3266726 发表于 2015-7-5 14:03
你好~ 能请教你一下，你看电镜时滴的外泌体样的浓度吗？我做的电镜效果感觉总是叠在一起，浓度不好掌握， ...

我大概是养了 1000万 肿瘤细胞，3天时间。 这些培液超离。得到的exosome用20ulPBS重悬的。

hzangs

好时之梦 发表于 2015-8-30 00:13
请问大神是用超离，还是用kit提的

超速离心得到的。  你可以问下johnny  他用sbi的kit 做过。 并且电镜图也不错