关于细胞培养上清中提取外泌体的相关问题

baishixiaoyaozi

这个很难给你确切答案，不同的细胞系分泌exosome的能力不一样，对血清饥饿的耐受不一样。你可以上pubmed或google scholar找一找，是否有人用过一样的细胞系，他们的实验步骤是怎么样的。比如我之前养原代细胞，用T150培养瓶，每次做实验需要8-10个T150 flask （80% confluency），用无血清培养基（没钱买exo-free FBS），培养24小时，收集上清（~120毫升），差数离心后再超离。200微升重悬exosome，终浓度大约10^8/mL。

baishixiaoyaozi

qyjinghui 发表于 2017-8-22 13:44
老师您好，想跟您咨询一个问题。我们打算用药物处理脐带间充质干细胞，然后对比处理后和处理前外泌体内容 ...

我的建议是药物处理之后马上换无血清培养基收集细胞外泌体，因为传代之后细胞状态会发生变化，此时收集的外泌体中miRNA种类和数量若发生变化，原因可能会同时来自药物处理以及传代导致的细胞状态变化。
祝实验顺利！

不用叫我老师，对于外泌体，我还是个新手。

baishixiaoyaozi

丫丫 发表于 2017-10-26 11:17
您好，请问您有关于无血清培养的相关文献吗？有的话能不能分享一下？感激不尽！！！ ...

这个手头还真没有，因为我自己的实验都是用的exo-free FBS养原代胶质细胞。
你试着参考Lonza网站：http://www.lonza.com/products-se ... d-formulations.aspx，有无血清培养的产品。

baishixiaoyaozi

丫丫 发表于 2017-10-27 08:16
您好！能透露一下您用的exo-free FBS是什么牌子的吗？

自己超离制备的。
https://www.thermofisher.com/us/ ... e-depleted-fbs.html

https://www.systembio.com/produc ... -isolation/exo-fbs/
这两个链接是文章里经常看见的牌子.

baishixiaoyaozi

qyjinghui 发表于 2017-10-29 17:12
还有个问题想请教老师，我们想研究加药处理后细胞外泌体内容物的改变，看到过两种方式，1.加药处理2天后 ...

我倾向于选择第一个实验方案。

baishixiaoyaozi

楠楠 发表于 2017-12-7 10:33
老师，您好，我想问你一下在采用pbs重悬洗去蛋白质的的时候是每个管加10ml吗？还是将几个离心管合到一起 ...

每个管加PBS，洗完后重悬再合并到一起。