外泌体处理细胞

kadak007

丁倩倩 发表于 2015-6-25 16:28
我做的一般都是裂解后的浓度偏低

惜名在5楼回复时写到：“譬如，你有100ul PBS-exo，经裂解后测蛋白浓度，计算出这100ul PBS-exo共含有20ug蛋白（假设）。那么，这100ul PBS-exo加到六孔板中的1个孔（2ml培养基）中，即得到10ug/ml的外泌体干预浓度了。”
仔细读完后，感觉他还是分两步走的，同时提2批等量的exo，1批裂解后测浓度；明确浓度后，另一批处理细胞。

kadak007

惜名 发表于 2015-4-19 10:46
10ug/ml是指，每ml培养上清中加入10ug以蛋白衡量的外泌体。
这牵扯到一个外泌体浓度计算的问题，目前认为 ...

请教下，pbs-exo冻存于 --80℃，溶解后还能用来处理细胞吗？效果怎样呢？
谢谢~

kadak007

惜名 发表于 2015-6-26 07:57
可以的，效果和新提的差不多，但是你不能在-80度放太久。
我个人经验，2-4周问题不大的。因为每次提出来 ...

处理细胞前，exo裂解后BCA测浓度，exo不裂解直接测浓度，这两种做法各有什么讲究吗?

kadak007

你好，请教下，做exo处理细胞时，每个孔里加多少细胞合适呢？总共需达到多大体积比较好呢？
譬如，25cm2规格培养瓶铺满时，细胞数大概是4-5*10^6，将这些细胞重悬于3ml的培养基，取多少加到孔里合适呢？

kadak007

惜名 发表于 2015-7-1 08:26
我做HUVEC（人脐静脉内皮细胞）的炎症反应，目测细胞密度50-95%的范围内都可以。
25cm2的瓶子面积为六孔 ...

非常感谢版主，完全取代了我老板的地位...... 我打算拿大鼠肌细胞试下
你做的实验 每个孔里exo加多少微克起步呢？有没有一个比较大众化的浓度梯度？

kadak007

惜名版主，用exo处理细胞，你有没有想过用小鼠源的细胞？毕竟后续功能实验时都得用小鼠的；
还是说，如果exo是人源的，那么处理的细胞也必须是人源的，功能实验时，不可能拿人做，只好用小鼠。
有没有纠结过这个问题？

kadak007

惜名 发表于 2015-7-3 16:40
有纠结过啊。。。
但是现实条件所限啊，人源的HUVEC是最常见、也是比较容易获得的。

呵呵，好的，感谢版主~

kadak007

惜名 发表于 2015-7-2 10:02
我用SBI提取的exo，得率之高令人乍舌。。。
所以我给出的浓度可能不是很准确，混杂了一些细胞培养液中的 ...

版主，请指导下，PBS-exo处理细胞，你一般让它们共同孵育多久呢？按小时算，还是按天算？

kadak007

惜名 发表于 2015-7-21 08:49
这个恐怕得看你的exo通过什么途径发挥作用、以及你要检测什么。
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如果你推测exo可以通过膜 ...

惜名版主，留言中提到 “做蛋白，16-24小时”，这个经验最开始有没有文献出处呢？可否推荐下？