关于Exo的WB检测

luckkit · 发表于 2015-3-31 11:31:52

急问，做Exo的WB检测前，Exo沉淀到底是该有RIPA裂解还是直接用PBS重悬？以前制备的Exo都是用PBS重悬的，600ng/ul左右，如果再加RIPA，是否蛋白浓度太低，能否直接加loading buffer煮沸，再超声，就上样跑胶？谢谢！

cxx123 · 发表于 2023-6-27 15:32:25

luckkit 发表于 2015-4-1 13:12
谢谢楼上诸位，直接加4x loading buffer 95度10min，冻回-80度，明天上样跑WB

直接加4x loading buffer，不加裂解液吗？

sonja_forever · 发表于 2016-12-13 14:01:06

Johnny 发表于 2015-5-23 19:17
对不测浓度

不测浓度，就也不用保证跟对照的细胞总蛋白上样量一致是吗？所以也不用设内参是吗？

泌外何教授 · 发表于 2016-10-12 10:34:17

Johnny 发表于 2016-10-8 13:04
貌似不能

好的，十分感谢

dancing · 发表于 2016-10-8 12:25:52

songkai900818 发表于 2015-3-31 21:00
可以用PBS先洗一下，然后再加RIPA裂解，一般沉淀不会轻易被洗掉

加ripa裂解的时候是直接涡旋就行吗，然后就可以加loading buffer或者冷冻保存，还是还有别的步骤

泌外何教授 · 发表于 2016-10-7 16:35:44

Johnny 发表于 2015-4-3 17:34
你离心的步骤具体是怎么样的？

CD9没有条带应该是正常的，感觉不是所有的细胞分泌的exosome都有CD9。

从exocarta中能查到我所需要的细胞能表达哪些蛋白吗

vipivy · 发表于 2016-8-1 21:58:17

求外泌体提取后WB的详细方法，本人菜鸟一枚。十分感谢!

yy8651 · 发表于 2015-5-27 11:29:42

有没有好心人能提供下WB的详细方法

kadak007 · 发表于 2015-5-27 10:59:29

Johnny 发表于 2015-5-23 19:17
对不测浓度

跑western前，很多人会常规测下浓度，请教下，意义何在呢？

G2SNOW · 发表于 2015-5-23 15:49:18

Johnny 发表于 2015-3-31 21:04
可直接加1X loading buffer 95度5-10min，然后上样跑WB

版主是指离心底部直接用loading buffer 收集沉淀吗？但是这样不是没法测浓度了吗？

yy8651 · 发表于 2015-5-8 09:14:24

WB的意义是什么呢？

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