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楼主: 丫丫

请教关于血浆外泌体提取的问题

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发表于 2017-7-14 16:55:50 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-16 10:35
1. -80保存对外泌体没有太大的影响,注意避免反复冻融
2. It depends on your purpose, a few hundred micr ...

您好,针对于这个问题,我想问一下,是否有相关的文章可以参考,可以分享一下么?非常感谢。
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发表于 2017-7-14 16:57:15 | 显示全部楼层
惘痕 发表于 2017-3-16 22:40
基本没有什么影响,做过对比分析

对比分析的数据是否已发表,可以分享链接么?谢谢
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发表于 2017-8-17 21:40:21 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-16 10:35
1. -80保存对外泌体没有太大的影响,注意避免反复冻融
2. It depends on your purpose, a few hundred micr ...

前辈你好,我们想提取外泌体RNA进行测序的话有什么办法提高RNA得率吗?
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发表于 2017-8-17 23:21:40 | 显示全部楼层
深呼吸的行者 发表于 2017-8-17 21:40
前辈你好,我们想提取外泌体RNA进行测序的话有什么办法提高RNA得率吗?

增加起始的exosome量,如果用Trizol试剂提取,沉淀时放在-20过夜,同时加入glycogen共沉淀。RNAseq,如果用total RNA大约需要1微克;如果用纯化的small RNA大约需要50-100纳克。
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发表于 2017-9-5 10:41:04 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-16 10:35
1. -80保存对外泌体没有太大的影响,注意避免反复冻融
2. It depends on your purpose, a few hundred micr ...

请问肝素钠、EDTA和柠檬酸钠这三种抗凝剂对血浆外泌体的提取有影响么?哪种最合适
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发表于 2017-9-5 21:31:47 | 显示全部楼层
slxiang 发表于 2017-9-5 10:41
请问肝素钠、EDTA和柠檬酸钠这三种抗凝剂对血浆外泌体的提取有影响么?哪种最合适 ...

如果用试剂盒的话,参考使用说明书。
我们实验室用EDTA,然后超速离心收集,对外泌体没有影响(至少用到外泌体的实验目前为止100%能够重复)。
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发表于 2017-9-23 20:16:33 | 显示全部楼层
baishixiaoyaozi 发表于 2017-9-5 21:31
如果用试剂盒的话,参考使用说明书。
我们实验室用EDTA,然后超速离心收集,对外泌体没有影响(至少用到 ...

请问可以发一下具体的超离步骤吗?
是否需要0.22的膜滤过一下。谢谢~
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发表于 2017-9-25 20:48:03 | 显示全部楼层
zzycircle 发表于 2017-9-23 20:16
请问可以发一下具体的超离步骤吗?
是否需要0.22的膜滤过一下。谢谢~

全血1000g离心10分钟,取血浆,然后1000g再离心10分钟去除血细胞。血浆用particle-free PBS稀释后离心,10000g离心30分钟去除micro-particles(也有的protocol使用0.22um滤膜去除micro-particles),上清转移至超速离心管,100000g离心2小时。沉淀(基本上看不见)用PBS重悬,NTA检测浓度和直径。
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发表于 2017-9-26 09:24:20 | 显示全部楼层
slxiang 发表于 2017-9-5 10:41
请问肝素钠、EDTA和柠檬酸钠这三种抗凝剂对血浆外泌体的提取有影响么?哪种最合适 ...

肝素抗凝会对后续PCR产生影响。若后续试验涉及PCR,不能使用肝素作为抗凝剂。
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发表于 2017-9-26 09:27:47 | 显示全部楼层
八戒在五湖 发表于 2017-4-23 09:59
提取效果怎么样呀,我的血浆没加抗凝,都凝固了,不知道能不能提

没加抗凝剂,待血液凝固后离心得到的上清是血清。
加了抗凝剂,自然分层后离心得到的上清叫血浆。
两者都可以提取外泌体的吧。我是用qiagen试剂盒直接提取的外泌体总RNA,血清血浆都可以。
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