请教关于血浆外泌体提取的问题

liyanyan

丫丫 发表于 2017-3-29 09:53
我用的是SBI的，其他的还没用过

请问提取的质量如何？

baishixiaoyaozi

深呼吸的行者 发表于 2017-10-31 09:46
谢谢前辈回答。那么glycogen应该加多少呢？

我一般加15-20微克，离心后就能看到沉淀。

深呼吸的行者

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-17 23:21
增加起始的exosome量，如果用Trizol试剂提取，沉淀时放在-20过夜，同时加入glycogen共沉淀。RNAseq，如果 ...

谢谢前辈回答。那么glycogen应该加多少呢？

zzycircle

baishixiaoyaozi 发表于 2017-9-27 21:26
我是按照所用的超速离心管大小来稀释的。我用5毫升的离心管，加1毫升plasma，用4毫升PBS稀释（最少用2.5 ...

好的谢谢啦  我用的5ml pbs稀释300u的

baishixiaoyaozi

zzycircle 发表于 2017-9-26 22:24
谢谢啦  可以再问一下PBS稀释比例吗

我是按照所用的超速离心管大小来稀释的。我用5毫升的离心管，加1毫升plasma，用4毫升PBS稀释（最少用2.5毫升PBS，超速离心样品体积不能少于离心管最大体积的70%）

zzycircle

baishixiaoyaozi 发表于 2017-9-25 20:48
全血1000g离心10分钟，取血浆，然后1000g再离心10分钟去除血细胞。血浆用particle-free PBS稀释后离心，1 ...

谢谢啦  可以再问一下PBS稀释比例吗

rjshimm

八戒在五湖 发表于 2017-4-23 09:59
提取效果怎么样呀，我的血浆没加抗凝，都凝固了，不知道能不能提

没加抗凝剂，待血液凝固后离心得到的上清是血清。
加了抗凝剂，自然分层后离心得到的上清叫血浆。
两者都可以提取外泌体的吧。我是用qiagen试剂盒直接提取的外泌体总RNA，血清血浆都可以。

rjshimm

slxiang 发表于 2017-9-5 10:41
请问肝素钠、EDTA和柠檬酸钠这三种抗凝剂对血浆外泌体的提取有影响么？哪种最合适 ...

肝素抗凝会对后续PCR产生影响。若后续试验涉及PCR，不能使用肝素作为抗凝剂。

baishixiaoyaozi

zzycircle 发表于 2017-9-23 20:16
请问可以发一下具体的超离步骤吗？
是否需要0.22的膜滤过一下。谢谢~

全血1000g离心10分钟，取血浆，然后1000g再离心10分钟去除血细胞。血浆用particle-free PBS稀释后离心，10000g离心30分钟去除micro-particles（也有的protocol使用0.22um滤膜去除micro-particles），上清转移至超速离心管，100000g离心2小时。沉淀（基本上看不见）用PBS重悬，NTA检测浓度和直径。

zzycircle

baishixiaoyaozi 发表于 2017-9-5 21:31
如果用试剂盒的话，参考使用说明书。
我们实验室用EDTA，然后超速离心收集，对外泌体没有影响（至少用到 ...

请问可以发一下具体的超离步骤吗？
是否需要0.22的膜滤过一下。谢谢~