超速离心法分离血清

baishixiaoyaozi

july 发表于 2016-11-22 21:24
请问500ul到1ml能提到多少呢？离心法吗？

根据我们实验室的结果，人血清EV含量大约为10的11－12次方／毫升，超离后（100000xg，2小时）大概还有40％左右留在上清里。

baishixiaoyaozi

ashey 发表于 2016-11-23 08:31
超离后这么多留在上清里？

是的，下次实验打算多离心一下，或者用更大的离心力150000xg。

baishixiaoyaozi

ashey 发表于 2016-11-23 19:51
期待楼主分享下一步的经验

分享是一定的，不过我不是楼主

baishixiaoyaozi

july 发表于 2016-11-24 12:26
怎么证明还留下了40%呢？

我们用NTA检测不同组分中exosome含量

baishixiaoyaozi

我是小白 发表于 2016-11-24 17:44
请问有提取血清的超速离心法的protocol吗？我自己也找了好多步骤，不知道用哪一个？ ...

我们实验室用两步离心，10000xg，30分钟，去除micro vesicles。100000-150000xg，2小时。

baishixiaoyaozi

yanhen521 发表于 2017-4-20 10:56
请问超离500ul血浆样本，配平时加多少PBS定容？因为血浆比较稠厚，需要充分的稀释。 ...

我们实验室一般1：1稀释。我们用的超速离心机比较小，300微升/离心管。

baishixiaoyaozi

jrr 发表于 2017-12-6 19:22
请问纯度如何，要不要再超滤

说实话，纯度不是太好。我跑胶，做过考染，还是有很多血清蛋白（50-70 kDa之间，以及100kDa以上）。
我没有试过超滤。

baishixiaoyaozi

ronaldchen 发表于 2018-1-12 15:02
你做过western么，谢谢

做过CD81。
最近想用albumin的抗体检测一下血清蛋白污染。

baishixiaoyaozi

ronaldchen 发表于 2018-1-15 14:15
你好，你是吸的还是倒的啊，我是1ml稀释到12ml超离10g 2小时，吸到剩一点，最后跑WB做不出来，不知道是不 ...

吸的，不敢倒。plamsa第一次超离后，吸取上清，加PBS洗，再超离。我一般吸到最后一点会把管子倾斜，然后吸掉管壁上残留的液体。

baishixiaoyaozi

ronaldchen 发表于 2018-1-17 14:10
也就是说，您吸到最后还剩一点倾斜，还是完全把液体吸干了的？
我之前是留了一点，
可以试试您的方法 ...

倾斜，让残留的液体沿着管壁流下来，尽量吸干。