关于SBI试剂提取Exo, 如何浓缩细胞上清

惜名

1、是用100kd的管子，买的时候，会给说明书的。我记得说明书建议是3000rpm*5min，但实际操作的时候可以自己调整，我一般是先用3000rpm转5min，拿出来看看浓缩了多少，然后再酌情考虑是否再离心一次。
2、我个人经验，10ml的培养基可以浓缩到1-2ml。但是，私下里认为，浓缩以后再用SBI试剂盒，杂质可能会更多。因为我用过浓缩和非浓缩的方法，感觉前者提取的“沉淀”明显增加了。

后来，我对SBI的protocol做了改良：先是1500rpm*30min，然后13000rpm*20min(这个转速是参考RIPA提取蛋白的，目的是进一步去除大分子和细胞碎片，选择13000rpm是因为，普通的离心机只能达到这个速度了)，然后再过0.22um的滤器，进一步去除大颗粒。

然后再用100kd的管子浓缩，这样纯度会增加不少~
即使不用管子浓缩，这样的步骤也有利于增加纯度。

供参考~

惜名

medjinjuan 发表于 2016-10-7 10:54
请问，你用SBI提取的exo打过电镜吗？是不是kit提取的很难出好看的图啊。

打过，嗯，杂质比较多，做了几次，才勉强满意。到了审稿人手里，也argue了一番，反正最后通过了，哈哈

惜名

medjinjuan 发表于 2016-10-13 13:30
大神大神，我看你写的改良的方法是最后再用100KD的超滤管子浓缩，而不是最开始就用，是我理解有误解了吗 ...

嗯，最后再用啊~前面你先用各种方法把能去掉的杂质都去掉，然后再浓缩，应该会使浓缩液不那么粘稠吧，个人感觉。。。如果一开始就浓缩，那么多杂质混在最后的浓缩液里，后面处理如果充分的话，应该也行~~

惜名

zjm337 发表于 2016-12-21 17:27
你好，想问一下100KDa浓缩时exosome不会被离心出去吗？？100KDa可以通过尺寸为多少纳米的颗粒？每次提取e ...

1、不会
2、不知道
3、看细胞分泌能力，我养DC，分泌很厉害
4、1/5
5、25ml培养基啊（浓缩后的也可以）