科研小白请教：尿液中的exosome其来源都有？

evilgod

我们最近也在尝试做尿中外泌体，还没有开始，你提取了吗，用的试剂盒还是超速离心法，丰度怎么样

暮色恭喜发财

evomicscience 发表于 2015-6-3 10:56
少量的血浆样品(少于1ml)经柱子纯化，纯度和收率都很好，但大量的尿液过柱子不现实.  ...

你说的柱子是什么柱子，主要是想除掉什么，是纯化后再抽提吗？

evomicscience

是SEC柱子。样品量仅柱体积的十分之一。血浆可直接过柱子，因为血浆中exosome丰度高。尿液要先浓缩，再过柱子。10ml 尿液是一个很合适的初始体积。

hzangs

evomicscience 发表于 2015-6-3 10:56
少量的血浆样品(少于1ml)经柱子纯化，纯度和收率都很好，但大量的尿液过柱子不现实.  ...

尿液过柱子也不是不可以。 因为考虑到尿液中大部分都是水，无机盐，氨氮化合物等小分子化合物。使用半透膜进行浓缩 再上样应该是不存在问题的。 保守估计 浓缩到上百倍 应该可以。

hzangs

evomicscience 发表于 2015-10-26 10:20
是SEC柱子。样品量仅柱体积的十分之一。血浆可直接过柱子，因为血浆中exosome丰度高。尿液要先浓缩，再过柱 ...

凝胶排阻的柱子，我尝试过含血清培液浓缩50倍上样，分离结果也不错

evomicscience

赞赞！多谢你的回复。但也要考虑到半透膜浓缩尿液可能降低尿exosome收率。1.疏水的exosome粘在膜上，不容易回收，2.尿蛋白THP可能会网住一些exosome,3. 还可能有成本，耗时问题。尿液exosome很有前途，大家现在还没认识到。

咏咩咩

evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

有兴趣~我在做尿液EV。想问下提了囊泡做WB看标志物前测蛋白浓度要不要加裂解液呢？有没有具体的步骤？谢谢~~

丝瓜

hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子，我尝试过含血清培液浓缩50倍上样，分离结果也不错

上次您是浓缩了50倍上样的，有没有试过浓缩倍数更高的？会不会造成较大的损耗？

丝瓜

hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子，我尝试过含血清培液浓缩50倍上样，分离结果也不错

上次您是浓缩了50倍上样的，有没有试过浓缩倍数更高的？会不会造成较大的损耗？

hzangs

丝瓜 发表于 2015-11-1 20:18
上次您是浓缩了50倍上样的，有没有试过浓缩倍数更高的？会不会造成较大的损耗？ ...

我使用qEV的凝胶排阻柱子做的试用。 样品为还exosomes-free FBS的细胞培养上清液。 50倍是我尝试的最高浓缩倍数了。 没有再高的尝试。
没有做过尿液的，不知道会怎么样。
50倍浓缩结果看，凝胶排阻柱子分离和超速离心分离 的收率差不多，不存在太大损耗。 尿液你可以自己尝试一下~