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楼主: 旋转的尾音

科研小白请教:尿液中的exosome其来源都有?

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发表于 2015-8-17 09:25:11 | 显示全部楼层
我们最近也在尝试做尿中外泌体,还没有开始,你提取了吗,用的试剂盒还是超速离心法,丰度怎么样
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发表于 2015-8-17 16:33:46 | 显示全部楼层
evomicscience 发表于 2015-6-3 10:56
少量的血浆样品(少于1ml)经柱子纯化,纯度和收率都很好,但大量的尿液过柱子不现实.  ...

你说的柱子是什么柱子,主要是想除掉什么,是纯化后再抽提吗?
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发表于 2015-10-26 10:20:43 来自手机 | 显示全部楼层
是SEC柱子。样品量仅柱体积的十分之一。血浆可直接过柱子,因为血浆中exosome丰度高。尿液要先浓缩,再过柱子。10ml 尿液是一个很合适的初始体积。
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发表于 2015-10-26 11:19:19 | 显示全部楼层
evomicscience 发表于 2015-6-3 10:56
少量的血浆样品(少于1ml)经柱子纯化,纯度和收率都很好,但大量的尿液过柱子不现实.  ...

尿液过柱子也不是不可以。 因为考虑到尿液中大部分都是水,无机盐,氨氮化合物等小分子化合物。使用半透膜进行浓缩 再上样应该是不存在问题的。 保守估计 浓缩到上百倍 应该可以。
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发表于 2015-10-26 11:20:49 | 显示全部楼层
本帖最后由 hzangs 于 2015-11-1 20:19 编辑
evomicscience 发表于 2015-10-26 10:20
是SEC柱子。样品量仅柱体积的十分之一。血浆可直接过柱子,因为血浆中exosome丰度高。尿液要先浓缩,再过柱 ...

凝胶排阻的柱子,我尝试过含血清培液浓缩50倍上样,分离结果也不错
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发表于 2015-10-26 14:19:12 来自手机 | 显示全部楼层
赞赞!多谢你的回复。但也要考虑到半透膜浓缩尿液可能降低尿exosome收率。1.疏水的exosome粘在膜上,不容易回收,2.尿蛋白THP可能会网住一些exosome,3. 还可能有成本,耗时问题。尿液exosome很有前途,大家现在还没认识到。
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发表于 2015-11-1 17:43:33 | 显示全部楼层
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白,量太大,网住了大量的Exosome,DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

有兴趣~我在做尿液EV。想问下提了囊泡做WB看标志物前测蛋白浓度要不要加裂解液呢?有没有具体的步骤?谢谢~~
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发表于 2015-11-1 20:17:40 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子,我尝试过含血清培液浓缩50倍上样,分离结果也不错

上次您是浓缩了50倍上样的,有没有试过浓缩倍数更高的?会不会造成较大的损耗?
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发表于 2015-11-1 20:18:03 | 显示全部楼层
hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子,我尝试过含血清培液浓缩50倍上样,分离结果也不错

上次您是浓缩了50倍上样的,有没有试过浓缩倍数更高的?会不会造成较大的损耗?
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发表于 2015-11-1 20:21:53 | 显示全部楼层
丝瓜 发表于 2015-11-1 20:18
上次您是浓缩了50倍上样的,有没有试过浓缩倍数更高的?会不会造成较大的损耗? ...

我使用qEV的凝胶排阻柱子做的试用。 样品为还exosomes-free FBS的细胞培养上清液。 50倍是我尝试的最高浓缩倍数了。 没有再高的尝试。
没有做过尿液的,不知道会怎么样。
50倍浓缩结果看,凝胶排阻柱子分离和超速离心分离 的收率差不多,不存在太大损耗。 尿液你可以自己尝试一下~
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