PEG聚沉+超速离心 试用报告 ：Sci Rep文章技术重复

woshiyywlly

我按前面的步骤试了下，同时取相同体积的培液，用Life的exosome isolation kit 作为对照，离心后目测PEG提出来的要比life的试剂盒少一半的样子，沉淀还没洗，不知道洗完之后还能剩多少exosome

hzangs

woshiyywlly 发表于 2016-5-12 14:42
我按前面的步骤试了下，同时取相同体积的培液，用Life的exosome isolation kit 作为对照，离心后目测PEG提 ...

感谢分享   单看沉淀 好像意义不大。 毕竟 大部分都是杂蛋白。  还是要看洗一次 超离后的量了~

clavichord

The next day, samples were
centrifuged in a tabletop centrifuge at maximum speed (Eppendorf, model 5810 R using an S-4-104 swing bucket
rotor; 3,214 g) for 1 hour at 4 °C.文中用的是3214g，您用的是10000g？

hzangs

clavichord 发表于 2016-5-13 14:15
The next day, samples were
centrifuged in a tabletop centrifuge at maximum speed (Eppendorf, model 5 ...

是的。  我对他的这个描述 表示不信任。  所以 直接上10000g的

hellfight

lz有没有做过前列腺癌的细胞，它们外泌体分泌多吗

zqlhiiaxyz

没有超速离心机，作者给的8%PEG+washing法的洗涤PEG这步没法做。有没人试过用8%PEG+5%PEG法呢？我看作者给的图中显示这种方法没有PEG+超离washing效果好，但好像比试剂盒效果好。

yulia

hzangs 发表于 2016-5-2 12:26
我使用的是 去除exosome的血清。

怎么去掉exosome？有专门无exosome的血清卖吗？

yulia

hzangs 发表于 2016-5-2 13:26
自己超离去除的

版主，是先把血清超离去掉exosome，再配置含10%FBS的培基？还是配置好含10%FBS培基后，把培基超离？你用的哪种方式？

yulia

lenoch 发表于 2016-5-11 12:49
我用的是0.22的，个人感觉会使exosome更纯一些，至少220nm以上的都滤掉了。会使你的电镜和nanosight更好 ...

说得有道理

yulia

把帖子挨篇都看完了，谢谢楼主的倾情分享