PEG聚沉+超速离心试用报告：Sci Rep文章技术重复

kao3234659 · 发表于 2017-1-22 20:21:24

PEG沉淀的时候需要放在转子上吧，静静的放在那里应该不行吧？还有你在做WB 时，是用了等体积还是等量的蛋白？

nick_a19 · 发表于 2017-3-3 22:17:26

这种方法提取的外泌体生物活性还保留了吗可以被细胞摄取吗

hzangs · 发表于 2017-3-5 13:22:01

nick_a19 发表于 2017-3-3 22:17
这种方法提取的外泌体生物活性还保留了吗可以被细胞摄取吗

你可以参考一下这篇原文。他们有分析过外泌体生物活性，在他们的结果来看不影响

xiaojinyuhen · 发表于 2017-3-8 17:02:02

谢谢版主大大，请问你跑WB用BCA定量细胞和外泌体定量成一样的吗？因为没看到您的actin或者tublin。而且PEG会有很多杂蛋白，即使定量成相同的量，可能由于杂蛋白的影响，外泌体的样本里外泌体的浓度还是很低，造成的WB结果反而是CD63在细胞的样本反而更多。

hzangs · 发表于 2017-3-8 18:07:27

xiaojinyuhen 发表于 2017-3-8 17:02
谢谢版主大大，请问你跑WB用BCA定量细胞和外泌体定量成一样的吗？因为没看到您的actin或者tublin。而且PEG ...

我的图是定量之后上相同量的蛋白跑WB的

dangerous517 · 发表于 2017-3-21 22:12:51

版主好人，我刚接触外泌体，想请问您，如果我想让提取出的外泌体共培养细胞该怎么操作？是把pbs重悬后的外泌体悬液混到培养基中混匀再一起加入培养皿吗？还是该怎么操作？

hzangs · 发表于 2017-3-21 23:24:38

dangerous517 发表于 2017-3-21 22:12
版主好人，我刚接触外泌体，想请问您，如果我想让提取出的外泌体共培养细胞该怎么操作？是把pbs重悬后的 ...

提取出的外泌体 PBS重悬，加到共培养的细胞上清中即可

arsenal-xie · 发表于 2017-3-21 23:30:13

hzangs 发表于 2016-7-28 21:30
我用的巨噬细胞上清大概10ml 巨噬细胞囊泡释放量很大的。

没有裂解，直接loading 煮煮就跑了 ...

请问你是用的多少X的loading buffer，因为上清提取的蛋白浓度就不高。

hzangs · 发表于 2017-3-22 13:49:44

arsenal-xie 发表于 2017-3-21 23:30
请问你是用的多少X的loading buffer，因为上清提取的蛋白浓度就不高。

1x

dangerous517 · 发表于 2017-3-23 12:23:00

版主好人，我也用的abcam的tsg101抗体，请问你稀释比例是多少

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