请教关于血浆外泌体提取的问题

丫丫

求助：1、请问用血将提取外泌体的话，提取之前血浆放-80保存会对外泌体有影响吗？
           2、如果用超离的方法提取血浆中的外泌体应该用多少体积呢？
           请各位大神赐教！不胜感激！

baishixiaoyaozi

zzycircle 发表于 2017-9-23 20:16
请问可以发一下具体的超离步骤吗？
是否需要0.22的膜滤过一下。谢谢~

全血1000g离心10分钟，取血浆，然后1000g再离心10分钟去除血细胞。血浆用particle-free PBS稀释后离心，10000g离心30分钟去除micro-particles（也有的protocol使用0.22um滤膜去除micro-particles），上清转移至超速离心管，100000g离心2小时。沉淀（基本上看不见）用PBS重悬，NTA检测浓度和直径。

深呼吸的行者

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-17 23:21
增加起始的exosome量，如果用Trizol试剂提取，沉淀时放在-20过夜，同时加入glycogen共沉淀。RNAseq，如果 ...

谢谢前辈回答。那么glycogen应该加多少呢？

baishixiaoyaozi

1. -80保存对外泌体没有太大的影响，注意避免反复冻融
2. It depends on your purpose, a few hundred microliter is enough for WB or RT-PCR detection of microRNA

lililala6868

全血1000g离心10分钟，取血浆，台湾威力彩然后1000g再离心10分钟去除血细胞。血浆用particle-free PBS稀释后离心，体彩排列5离心30分钟去除micro-particles（也有的protocol使用0.22um滤膜去除micro-particles

   

future1994

baishixiaoyaozi 发表于 2017-9-25 20:48
全血1000g离心10分钟，取血浆，然后1000g再离心10分钟去除血细胞。血浆用particle-free PBS稀释后离心，1 ...

您好老师，超速离心完基本看不到沉淀，您是直接把所有上清都吸掉吗，还是会留点

sunluyao014488

丫丫 发表于 2017-3-29 09:53
我用的是SBI的，其他的还没用过

您好，想请问一下您用的SBI试剂盒提取血浆外泌体，可以分享一下SBI哪一款试剂盒吗？货号之类的呢？谢谢，万分感激

CheungKL

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-17 23:21
增加起始的exosome量，如果用Trizol试剂提取，沉淀时放在-20过夜，同时加入glycogen共沉淀。RNAseq，如果 ...

老师你好，我想问下你提取RNA的protocol可以发一下吗？还有glycogen你用的是哪个公司的？
太感谢了！

baishixiaoyaozi

快乐的人 发表于 2019-3-22 10:56
请问一下提取血浆中的miRNA 需要什么试剂盒

mirVana: https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/AM1560
miRNeasy: https://www.qiagen.com/us/shop/s ... orderinginformation

暂时想到这两个

快乐的人

baishixiaoyaozi 发表于 2018-7-31 04:16
http://www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/specimen-collection/blood-collection/venous-collect ...

请问一下提取血浆中的miRNA 需要什么试剂盒

baishixiaoyaozi

快乐的人 发表于 2018-7-28 09:57
用EDTA抗凝  配方的比例是多少呀

http://www.bd.com/en-us/offering ... -faq/edta-tubes-faq

快乐的人

baishixiaoyaozi 发表于 2017-9-5 21:31
如果用试剂盒的话，参考使用说明书。
我们实验室用EDTA，然后超速离心收集，对外泌体没有影响（至少用到 ...

用EDTA抗凝  配方的比例是多少呀

快乐的人

丫丫 发表于 2016-11-16 14:54
好的！十分感谢！

请问一下为什么离心前要用PBS稀释血浆，不稀释可以吗？