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hzang老师您好，我想问一下，我是用植物提取的外泌体，一直没找到鉴定蛋白的marker,只做了电镜和NTA，不知道蛋白这块该怎么鉴定，希望老师指导下

hzangs

psyerLD 发表于 2019-11-19 14:52
谢谢hzangs老师！！我看了您在杭州的那个课件，里面写了超离最后一步不要倒出上清，意思就是这一步操作的 ...

是的，

psyerLD

hzangs 发表于 2019-11-19 13:51
1、 负染即可。如果有条件 冷冻电镜也OK
2、-80可以长期保存，几个月没问题。 冷冻过的样品 可能会存在抱 ...

谢谢hzangs老师！！我看了您在杭州的那个课件，里面写了超离最后一步不要倒出上清，意思就是这一步操作的时候我用移液管将上清吸走吗？

hzangs

psyerLD 发表于 2019-11-19 13:26
Hzangs老师，有几个问题想请教您，万分感谢！！
1.外泌体做电镜的话需要做冷冻电镜吗？
2.外泌体提取出来之 ...

1、 负染即可。如果有条件 冷冻电镜也OK
2、-80可以长期保存，几个月没问题。 冷冻过的样品 可能会存在抱团   粒径增大等情况。
3、不是，大概率你都收丢了。 一般检测的囊泡数目 应该在10^9左右。你这比大家的数据低了2个数量级

psyerLD

Hzangs老师，有几个问题想请教您，万分感谢！！
1.外泌体做电镜的话需要做冷冻电镜吗？
2.外泌体提取出来之后大概可以在-80保存多久还能保持活性？如果提取出来先在4°放置两天再放到-80保存会会电镜或NTA鉴定有影响吗？
3，我用含有5%血清替代物的400ml细胞上清液提取外泌体，最后用100ulPBS重悬，检测NTA发现一点囊泡都没有，但是第一次同样的方法提取出来的200ml不含血清替代物的细胞上清，50u重悬后可以检测出来大约10的7次方个囊泡数，会是因为血清替代物的影响吗？

danielle

我发现我在1 ml PBS里加3-4 ul tween20，再上NTA测量，发现有很高浓度的颗粒，粒径可能小于100 nm，你们有人遇到过这个情况吗？这件事情的起因是我加了15% tween-20破坏外泌体后，稀释后上NTA，发现颗粒浓度还升高了。

hzangs

z6234206 发表于 2018-11-9 20:36
请问，提取完外泌体后，需要用多少浓度处理细胞？如何处理，是直接将外泌体添加到待处理的细胞上清液中么 ...

不同细胞 不同功能研究不一样。  你需要自己去摸索

z6234206

请问，提取完外泌体后，需要用多少浓度处理细胞？如何处理，是直接将外泌体添加到待处理的细胞上清液中么

hzangs

nixiao 发表于 2018-9-12 20:38
您好，我是细胞上清提外泌体，想看两个细胞共培养后，有没有特殊因子的上调，除了做外泌体的蛋白组学还能不 ...

你只是想看分泌组有没有变化。  直接沉淀所有的胞外蛋白就可以。 如果特异性的想看外泌体中是否有因子变化 才需要做外泌体的蛋白质组学。

nixiao

您好，我是细胞上清提外泌体，想看两个细胞共培养后，有没有特殊因子的上调，除了做外泌体的蛋白组学还能不能用离心后上清提的蛋白再做蛋白组学呢？大神，你知道有没有人这样做过呢？