超离提取血清外泌体的方法

xrhaha

好的好的，我试着按你说的去试一下，太感谢啦！

anlinyuan

xrhaha 发表于 2020-1-11 10:46
感谢回复！时隔这么久，不知道你还在做外泌体吗？想请教一下是否离过MCF-7细胞的外泌体？我用100mL培基离 ...

嗯的我还在做，那你离完之后有没有测过蛋白浓度，有没有做过WB呢，其实可能真的啥也看不见，另外你可以尝试一下第一次离心完多留点儿底儿试试，外泌体可以用PBS重悬直接冻-80，也可以用RIPA裂解液重悬用于以后做WB，如果做细胞实验的话外泌体最好用新鲜的

xrhaha

anlinyuan 发表于 2019-9-8 22:10
PBS用滤膜滤一下就可以了

感谢回复！时隔这么久，不知道你还在做外泌体吗？想请教一下是否离过MCF-7细胞的外泌体？我用100mL培基离心基本上看不到任何东西，这是正常现象吗？还有外泌体直接用商用PBS重悬-80保存就行，还是要另外加东西让它稳定呀？

anlinyuan

xrhaha 发表于 2019-9-8 13:07
你好，请问一下你这个问题解决了吗？

PBS用滤膜滤一下就可以了

xrhaha

anlinyuan 发表于 2019-4-17 17:11
谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了， ...

你好，请问一下你这个问题解决了吗？

jaybecks

hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑 ...

请问大神，我也在做血清外泌体，可是感觉提取的外泌体纯度不好，现在用的10万转3h+2h，应该怎么办哇

anlinyuan

hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑 ...

谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了，这难道是杂质蛋白？用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢？

anlinyuan

yunxinxu 发表于 2019-4-1 07:40
试试管子套管子，不保证安全！！

哈哈这样的话实验室老师会把我轰出来

anlinyuan

谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了，这难道是杂质蛋白？用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢？

hzangs

离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑使用PBS稀释10~20倍  然后再用38.5的管子去离心。  一般10万g 70分钟 是可以的。 但是很难看到沉淀。