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标题: 求助！PEG聚沉--磷钨酸负染--exo电镜鉴定 [打印本页]
作者: zqlhiiaxyz    时间: 2016-7-19 11:46
标题: 求助！PEG聚沉--磷钨酸负染--exo电镜鉴定
各位老师及大神们！麻烦大家帮忙看看图中红笔画出的是外泌体吗？是用PEG6000聚沉后，2%磷钨酸负染后打电镜的。谢谢大家！[attach]858[/attach][attach]859[/attach][attach]860[/attach][attach]861[/attach][attach]862[/attach][attach]863[/attach][attach]864[/attach]
作者: 生物小博    时间: 2016-7-19 11:58
个人认为应该是  我也打过一次电镜  但是样品杂质太多  看到的外泌体太少    请问你这杂质主要是啥   会影响你后续试验吗  需要除去吗
作者: zqlhiiaxyz    时间: 2016-7-19 12:00
我觉得可能是PEG吧！后续我们想提RNA，估计影响不大吧
作者: zqlhiiaxyz    时间: 2016-7-20 19:30
各位大神！麻烦大家再帮我看看。上面这个是外泌体吗？发文章能用这种图吗?觉得背景好复杂
作者: hzangs    时间: 2016-7-21 12:06
看着有点杂。 你可以稀释一点再打 看看。  
作者: 子非鱼    时间: 2016-7-21 15:22
楼主，你这是提取的细胞培液exo，还是血清的呀？PEG聚沉后直接打电镜吗？还是也经过超离了？
作者: zqlhiiaxyz    时间: 2016-7-25 19:40
非常感谢大家的回复！
@子非鱼 是提取的血清的。没经过超离，PEG聚沉后，PBS稀释后打的
作者: 子非鱼    时间: 2016-7-26 16:08
本帖最后由 子非鱼 于 2016-7-26 16:12 编辑
zqlhiiaxyz 发表于 2016-7-25 19:40
非常感谢大家的回复！
@子非鱼 是提取的血清的。没经过超离，PEG聚沉后，PBS稀释后打的 ...

谢谢楼主回复！我还想继续问：楼主是8%的PEG6000聚沉吗？多少血清提取的exo，PEG聚沉了几次？多少PBS溶解上的电镜？我也做血清，做了两次电镜都不好，想从楼主这取点经！
作者: zqlhiiaxyz    时间: 2016-7-28 13:24
是血清先过0.45um滤器，剩下350ul，经8%、5%PEG两次沉淀（没有超离机），40ulPBS溶的，取了其中10ul，稀释了5-10倍打的。我这个也很不好，背景太复杂了!
作者: 小孔加油    时间: 2016-7-28 15:15
楼主，请问您是PEG6000怎么提取外泌体，有没有protocol提供？现在刚买回PEG6000粉末，不知道怎么配制
作者: zqlhiiaxyz    时间: 2016-7-28 16:18
16gPEG+5.844g氯化钠，定容至100ml去离子水（水高压灭菌），即为16%的PEG液
作者: 子非鱼    时间: 2016-8-5 15:04
zqlhiiaxyz 发表于 2016-7-28 13:24
是血清先过0.45um滤器，剩下350ul，经8%、5%PEG两次沉淀（没有超离机），40ulPBS溶的，取了其中10ul，稀释 ...

谢谢楼主回复！！
作者: malingran    时间: 2017-3-23 15:47
求楼主的电镜负染的protocol
作者: sunshineZY    时间: 2017-5-1 21:20
求问大神外泌体电镜样本制备过程是什么？可否给我参考一下，我最近也要做。非常感谢
作者: 五月灼蓁    时间: 2017-5-15 17:33
zqlhiiaxyz 发表于 2016-7-28 13:24
是血清先过0.45um滤器，剩下350ul，经8%、5%PEG两次沉淀（没有超离机），40ulPBS溶的，取了其中10ul，稀释 ...

求楼主8%，5%PEG具体步骤，都是4℃过夜吗？之后用多少离心的，谢谢楼主
作者: shaw177    时间: 2018-2-2 22:22
mark一下
作者: hereissyk    时间: 2018-3-18 20:53
有外泌体，但是由于是PEG提取的，杂质太多



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