外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 外泌体电镜鉴定 [打印本页]
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-4 11:05
标题: 外泌体电镜鉴定
感觉电镜结果怪怪的，我看好多人的电镜图都是单个的，但是我的怎么是好几个在一个囊泡里面一样的，这个是外泌体么...

作者: lwj7853    时间: 2015-2-4 12:44
TEM还是SEM？感觉真像聚团了，大小正确吗？
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-4 16:51
Johnny 发表于 2015-2-4 12:14
没有标尺。。。可能是exo聚集成团了吧

我只截了一部分，回复里面不知道再怎么放图片了....不过上面那个图是500nm的标尺...成团会不会跟我送去做电镜的样本有关呢，我是在EP管里直接固定exosome的沉淀送去电镜室的
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-4 16:54
lwj7853 发表于 2015-2-4 12:44
TEM还是SEM？感觉真像聚团了，大小正确吗？

是做的透射电镜，大小的话觉得比较小额...感觉＜50nm的比较多
作者: liuzhen200892    时间: 2015-2-5 11:00
请问，做外泌体电镜，应该怎么准备材料？因为是要到年后才能排上，我想把样本先送到电镜室，但是那边没有-80冰箱。
不知道外泌体在4度下可以保存多久？要不要什么特殊处理？
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-5 14:19
liuzhen200892 发表于 2015-2-5 11:00
请问，做外泌体电镜，应该怎么准备材料？因为是要到年后才能排上，我想把样本先送到电镜室，但是那边没有-8 ...

我们这边是电镜室给的固定液，提出来外泌体之后，直接用固定液固定沉淀，放在4°冰箱，排队等着，好像固定后能够放挺久的，然后还有的是直接送PBS悬液过去，不过这个我不是很清楚了
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-5 14:22
Johnny 发表于 2015-2-4 20:17
＜50nm是略小了点。要判定的话，结合WB、nanosight吧

恩啊.......
作者: liuzhen200892    时间: 2015-2-7 15:26
muzi.csu 发表于 2015-2-5 14:19
我们这边是电镜室给的固定液，提出来外泌体之后，直接用固定液固定沉淀，放在4°冰箱，排队等着，好像固 ...

直接用戊二醛固定液固定吗？我现在的是已经解冻了，暂时做不了。我直接再冻住没关系吧？
作者: muzi.csu    时间: 2015-2-9 10:29
liuzhen200892 发表于 2015-2-7 15:26
直接用戊二醛固定液固定吗？我现在的是已经解冻了，暂时做不了。我直接再冻住没关系吧？ ...

(⊙o⊙)…这个我不是很清楚额
作者: 苏静    时间: 2015-3-4 18:40
用之前稍微超声一下会好一些
作者: 微泡biomarker    时间: 2015-3-30 20:41
我也想做电镜，现在就是在样品准备上面出了问题，请问一下 你这个电镜的样品前处理是怎么做的啊 ，我上次直接PBs重悬后 铜网上点样，风干后 出来的都是 圆圈状的上面有个黑色的点，不知道为什么？请大家给分析一下。
作者: fengshilou    时间: 2015-4-13 23:12
muzi.csu 发表于 2015-2-5 14:19
我们这边是电镜室给的固定液，提出来外泌体之后，直接用固定液固定沉淀，放在4°冰箱，排队等着，好像固 ...

这个方法挺好的，可以借鉴下
作者: fengshilou    时间: 2015-4-13 23:14
微泡biomarker 发表于 2015-3-30 20:41
我也想做电镜，现在就是在样品准备上面出了问题，请问一下 你这个电镜的样品前处理是怎么做的啊 ，我上次 ...

我们的也是啊，同感
作者: 大琳宝儿    时间: 2015-4-21 08:14
作者: nene    时间: 2015-4-21 10:43
请问，这是用什么方法提取的exosome? PBS不很清楚。kit的保存液应该是4度2星期问题不大
作者: muzi.csu    时间: 2015-4-27 12:46
我是用SBI的试剂盒分离的外泌体，没做什么处理，就是分离后把固定液直接加到管子里了。
作者: wenzhouzsl    时间: 2015-4-28 19:16
大师们，exosome电镜观察样本制备，看了几篇硕士论文说exosome溶解于液体后直接滴于铜网上，然后加醋酸铀染色，上机。
说的很简单哦。
可是我今天问了另外一位同学，做电镜做了一年，他是做蛋白的，他的经验是铜网最好做亲水化处理。
这一步是不是很关键啊？
作者: meme    时间: 2015-10-22 15:13
苏静 发表于 2015-3-4 18:40
用之前稍微超声一下会好一些

你好，外泌体做电镜之前还是可以超声的呀？
作者: wanghx_85    时间: 2015-10-22 23:34
我做的电镜图片和你的差不多，不过稍微好点儿，能看到单个囊泡，这应该是成团了，再提醒你一句保护好你的图片，防止被盗用
作者: 苏静    时间: 2015-11-11 22:00
meme 发表于 2015-10-22 15:13
你好，外泌体做电镜之前还是可以超声的呀？

可以稍微超声一下，也可以不超声。
作者: w403185742    时间: 2015-12-17 16:57
你好，我是初做外泌体的菜鸟，我也遇到了外泌体抱团的情况，请问这个问题你解决了吗？
作者: 子非鱼    时间: 2016-5-19 15:30
muzi.csu 发表于 2015-4-27 12:46
我是用SBI的试剂盒分离的外泌体，没做什么处理，就是分离后把固定液直接加到管子里了。 ...

你好！我也是用SBI试剂盒提取外泌体（血清和细胞的都有），做了两次TEM，聚焦不清楚，电镜老师说我制样的问题，想和楼主交流一下：楼主用SBI提取外泌体的量有多少？固定前溶在多少的PBS里？有没有做过血清外泌体的提取，然后多少血清提取，之后多少PBS溶，TEM结果好不好？想有个漂亮的TEM图，好难啊.....
作者: 子非鱼    时间: 2016-5-19 15:31
muzi.csu 发表于 2015-4-27 12:46
我是用SBI的试剂盒分离的外泌体，没做什么处理，就是分离后把固定液直接加到管子里了。 ...

话说：我两次TEM前都没固定.....不造是不是这个问题.....
作者: muzi.csu    时间: 2016-7-6 20:37
wanghx_85 发表于 2015-10-22 23:34
我做的电镜图片和你的差不多，不过稍微好点儿，能看到单个囊泡，这应该是成团了，再提醒你一句保护好你的图 ...

好久没登了，谢谢
作者: muzi.csu    时间: 2016-7-6 20:38
w403185742 发表于 2015-12-17 16:57
你好，我是初做外泌体的菜鸟，我也遇到了外泌体抱团的情况，请问这个问题你解决了吗？ ...

没有解决  后来
作者: muzi.csu    时间: 2016-7-6 20:39
子非鱼 发表于 2016-5-19 15:30
你好！我也是用SBI试剂盒提取外泌体（血清和细胞的都有），做了两次TEM，聚焦不清楚，电镜老师说我制样的 ...

我的挺多外泌体的，肉眼可见沉淀，沉淀直接固定液固定的，我做的是细胞上清的(⊙o⊙)…



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