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标题: 大家给看看这个是不是外泌体 [打印本页]
作者: w403185742    时间: 2016-4-5 19:44
标题: 大家给看看这个是不是外泌体
这个是我差速离心分离70ml细胞培养上清液，沉淀PBS重悬后，80KV透射电镜打出来的
作者: hzangs    时间: 2016-4-5 21:53
前两张图可能不是。 最后一张图中的大的那个粒子，看上去有可能是exosome，但也能是支原体 o(╯□╰)o  粒子太少了  不太好确定，最好有多个这样的粒子看看 才好判断。
作者: 千夏的失火夏天    时间: 2016-4-5 21:53
想请问楼主，一般提取的外泌体用PBS重悬后，如果不能立即做电镜观察，要怎么保存呢？
作者: w403185742    时间: 2016-4-5 22:33
千夏的失火夏天 发表于 2016-4-5 21:53
想请问楼主，一般提取的外泌体用PBS重悬后，如果不能立即做电镜观察，要怎么保存呢？ ...

我一般放-80保存
作者: w403185742    时间: 2016-4-6 16:30
hzangs 发表于 2016-4-5 21:53
前两张图可能不是。 最后一张图中的大的那个粒子，看上去有可能是exosome，但也能是支原体 o(╯□╰)o  粒 ...

您好，我电镜下拍到的这些囊泡容易聚团，有什么好的方法把它们分开吗？
作者: 微泡biomarker    时间: 2016-4-6 18:58
hzangs 发表于 2016-4-5 21:53
前两张图可能不是。 最后一张图中的大的那个粒子，看上去有可能是exosome，但也能是支原体 o(╯□╰)o  粒 ...

请教一下 怎么 判断 前两张不是exosome呢？
作者: hzangs    时间: 2016-4-6 20:38
微泡biomarker 发表于 2016-4-6 18:58
请教一下 怎么 判断 前两张不是exosome呢？

前两张的图  没有明显的膜结构。
关键是我在别人的电镜图里见到过这样的圆球，很可能是染料里的一些东西。那个朋友的电镜图里好多这样的泡泡，而且有的泡泡所在的铜网的位置部分破裂，但泡泡还是那么标准的球，明显不是exosome。
作者: hzangs    时间: 2016-4-6 20:40
w403185742 发表于 2016-4-6 16:30
您好，我电镜下拍到的这些囊泡容易聚团，有什么好的方法把它们分开吗？ ...

这个我还真不太清楚。你使用新鲜的样品 浓度略微低一些， 会让抱团的少一点。
我打过放置一段时间的 和 新鲜的。  放置一段时间的 确实会有很多抱团的。
作者: 微泡biomarker    时间: 2016-4-6 20:46
hzangs 发表于 2016-4-6 20:38
前两张的图  没有明显的膜结构。
关键是我在别人的电镜图里见到过这样的圆球，很可能是染料里的一些东西 ...

如果没有用染料 也会出现这样的圆圈呢，会是什么呢
作者: hzangs    时间: 2016-4-6 20:53
微泡biomarker 发表于 2016-4-6 20:46
如果没有用染料 也会出现这样的圆圈呢，会是什么呢

铜网上的结构  或者是PBS里的。   这个结构确实很奇怪
作者: 徐风    时间: 2016-4-7 10:31
exosome量太少了，看不出来哈！电镜观察时，建议调整exosomes上样量。
作者: 千夏的失火夏天    时间: 2016-4-10 14:56
w403185742 发表于 2016-4-5 22:33
我一般放-80保存

冻融以后囊泡会不会破坏了，电镜下还可以看的明显的囊泡结构么？
作者: 千夏的失火夏天    时间: 2016-4-10 14:58
w403185742 发表于 2016-4-5 22:33
我一般放-80保存

还想问一下，平时是用磷钨酸负染的么，背景有很多黑色的东西，可以用PBS洗么？
作者: zhaojia    时间: 2016-4-10 18:38
-80吗？-20可以吗
作者: fight2015    时间: 2016-4-12 10:53
徐风 发表于 2016-4-7 10:31
exosome量太少了，看不出来哈！电镜观察时，建议调整exosomes上样量。

请问，exo上样量大概多少比较适宜
作者: 徐风    时间: 2016-4-15 16:19
上样体积为20-30ul，浓度为零点几微克每微升



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