外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 求鉴定 [打印本页]
作者: effiezhang66    时间: 2015-11-5 17:36
标题: 求鉴定
收集上清后4度过了3天才开始提的，然后50ulPBS重悬样本，隔天才滴染的样本，TEM下大多数都抱团了，单个的像这样的是吗？感觉染料的颗粒好大，不知道是不是，5555求指点。@JOHNNY@惜名.........等大神
作者: effiezhang66    时间: 2015-11-6 00:11
Johnny 发表于 2015-11-5 19:06
标尺是100 nm，那你的视野下颗粒好小啊

我没有标记清楚我觉得视野正中央的是两个，哪些黑点点是染料颗粒
作者: effiezhang66    时间: 2015-11-6 00:13
我感觉箭头指的像是，还请大神指教
作者: effiezhang66    时间: 2015-11-6 14:38
Johnny 发表于 2015-11-6 10:50
哦哦   你染的胶体金吗？

不是，55555，普通负染，不知道为什么染料颗粒这么大，难道是染的时间太长了？
作者: zqy2002    时间: 2015-11-8 21:57
一般采用磷酸钨负染。如果用磷酸钨负染成功的话，背景应该是黑色的，exosome应该是白亮的。
作者: effiezhang66    时间: 2015-11-16 10:34
zqy2002 发表于 2015-11-8 21:57
一般采用磷酸钨负染。如果用磷酸钨负染成功的话，背景应该是黑色的，exosome应该是白亮的。 ...

求问具体步骤？我是PBS重悬后（没有固定），一天后送的滴染，滴到铜网上，然后直接看的
作者: zouxue1985    时间: 2015-11-16 15:13
你这个图好像不太对。我7月的时候观察了1次。负染后周围黑色，蛋白是白色。也没有你这样成团。
作者: zqy2002    时间: 2015-11-17 20:35
effiezhang66 发表于 2015-11-16 10:34
求问具体步骤？我是PBS重悬后（没有固定），一天后送的滴染，滴到铜网上，然后直接看的 ...

1、        将PBS或ddH20重悬的exosome悬液混合均匀，取一滴/20微升滴于铜网上，等待5分钟exosome沉淀；
2、        用吸水滤纸从侧面吸取铜网表面液滴；
3、        滴加磷钨酸一滴/20微升于铜网上；
4、        5分钟后同前用吸水滤纸吸取液滴；
5、        静置5分钟风干后电镜观察。
作者: 枫林摇曳    时间: 2015-11-19 21:41
Johnny 发表于 2015-11-6 10:50
哦哦   你染的胶体金吗？

请问版主有没有可能，负染后背景是白色的，exosome是黑色的情况？还有做共聚焦时用的染料大概都有哪些呢，求告知
作者: effiezhang66    时间: 2015-11-20 23:44
zouxue1985 发表于 2015-11-16 15:13
你这个图好像不太对。我7月的时候观察了1次。负染后周围黑色，蛋白是白色。也没有你这样成团。 ...

好的，谢谢您！
作者: effiezhang66    时间: 2015-11-20 23:46
zqy2002 发表于 2015-11-17 20:35
1、        将PBS或ddH20重悬的exosome悬液混合均匀，取一滴/20微升滴于铜网上，等待5分钟exosome沉淀；
2、        用 ...

太感谢啦！
作者: zqy2002    时间: 2015-11-20 23:51
my pleasure~
作者: 流氓兔2841    时间: 2015-11-21 00:23
zqy2002 发表于 2015-11-20 23:51
my pleasure~

请问有负染技术步骤吗，用于鉴定exosome的，谢谢
作者: zqy2002    时间: 2015-11-21 22:51
请参照11楼
作者: 枫林摇曳    时间: 2015-11-23 20:07
Johnny 发表于 2015-11-20 00:03
这个具体你参照paper中exosome的电镜图就知道了。虽说负染是把空白的地方染上颜色  但也不是那种背景全黑 ...

如果用一般的膜染料，共聚焦能不能出来比较好的结果呢？



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