外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 超离提取血清外泌体的方法 [打印本页]
作者: anlinyuan    时间: 2019-3-31 18:45
标题: 超离提取血清外泌体的方法
想请教大家，超离提人血清外泌体，文献有说15万g过夜离心，也有1万g70min*2，有点蒙圈，请问大家具体怎么处理的呢？？另外实验室条件有限，只有38.5ml大超离管离心不到2ml血清，是否会影响得率呢？？谢谢！！
作者: yunxinxu    时间: 2019-4-1 07:40
试试管子套管子，不保证安全！！
作者: hzangs    时间: 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑使用PBS稀释10~20倍  然后再用38.5的管子去离心。  一般10万g 70分钟 是可以的。 但是很难看到沉淀。
作者: anlinyuan    时间: 2019-4-17 17:11
谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了，这难道是杂质蛋白？用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢？
作者: anlinyuan    时间: 2019-4-17 17:12
yunxinxu 发表于 2019-4-1 07:40
试试管子套管子，不保证安全！！

哈哈这样的话实验室老师会把我轰出来
作者: anlinyuan    时间: 2019-4-17 17:13
hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑 ...

谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了，这难道是杂质蛋白？用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢？
作者: jaybecks    时间: 2019-8-7 14:22
hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑 ...

请问大神，我也在做血清外泌体，可是感觉提取的外泌体纯度不好，现在用的10万转3h+2h，应该怎么办哇
作者: xrhaha    时间: 2019-9-8 13:07
anlinyuan 发表于 2019-4-17 17:11
谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了， ...

你好，请问一下你这个问题解决了吗？
作者: anlinyuan    时间: 2019-9-8 22:10
xrhaha 发表于 2019-9-8 13:07
你好，请问一下你这个问题解决了吗？

PBS用滤膜滤一下就可以了
作者: xrhaha    时间: 2020-1-11 10:46
anlinyuan 发表于 2019-9-8 22:10
PBS用滤膜滤一下就可以了

感谢回复！时隔这么久，不知道你还在做外泌体吗？想请教一下是否离过MCF-7细胞的外泌体？我用100mL培基离心基本上看不到任何东西，这是正常现象吗？还有外泌体直接用商用PBS重悬-80保存就行，还是要另外加东西让它稳定呀？
作者: anlinyuan    时间: 2020-1-13 20:45
xrhaha 发表于 2020-1-11 10:46
感谢回复！时隔这么久，不知道你还在做外泌体吗？想请教一下是否离过MCF-7细胞的外泌体？我用100mL培基离 ...

嗯的我还在做，那你离完之后有没有测过蛋白浓度，有没有做过WB呢，其实可能真的啥也看不见，另外你可以尝试一下第一次离心完多留点儿底儿试试，外泌体可以用PBS重悬直接冻-80，也可以用RIPA裂解液重悬用于以后做WB，如果做细胞实验的话外泌体最好用新鲜的
作者: xrhaha    时间: 2020-1-15 10:22
好的好的，我试着按你说的去试一下，太感谢啦！
作者: Never    时间: 2020-4-9 16:55
我现在第一次离完之后沉淀和最底下的培养基都留着，然后用PBS吹打管壁，再去离心，现在送到公司检测，不知道结果如何。
作者: haoyaying1995    时间: 2020-7-5 12:41
你好，我们也是只有38.5ml的离心管，血清量也是2ml，请问你之后做BCA定量了么？浓度大概多少呢？
作者: haoyaying1995    时间: 2020-7-5 12:44
你好，我们也是只有38.5ml的离心管，血清量也是2ml，请问你之后做BCA定量了么？浓度大概多少呢？
作者: haoyaying1995    时间: 2020-7-6 08:42
你好，我们也是只有38.5ml的离心管，血清量也是2ml，请问你之后做BCA定量了么？浓度大概多少呢？
作者: zhangchao    时间: 2020-7-19 22:43
xrhaha 发表于 2020-1-11 10:46
感谢回复！时隔这么久，不知道你还在做外泌体吗？想请教一下是否离过MCF-7细胞的外泌体？我用100mL培基离 ...

你好 你也是用培养基提外泌体么，浓度怎么样呢？13844196076 这是我微信 欢迎学习交流。
作者: MMM    时间: 2021-1-8 17:29
anlinyuan 发表于 2019-4-17 17:13
谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了 ...

你好 我提取MVs也遇到这样的问题了 血清：PBS稀释后转5000g 20000g都有这种沉淀 请问你是怎么解决这个问题的
作者: WinterBlinder    时间: 2021-5-16 20:39
感谢分享
作者: 加油干！    时间: 2021-9-7 16:14
想问一下，买的细胞培养血清，想要提外泌体，可以直接进行超离吗?超离后没有外泌体的血清还可以用来培养细胞吗？
作者: 761628900    时间: 2023-9-19 11:10
hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。 另外血清可以考虑 ...

你好请问下，如果我用培基先配20%FBS去超离，大概需要离多久，上次我是离了6个h，感觉时间还是好长，可以离短一些时间嘛



欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (https://www.exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3