外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 外泌体BCA测出蛋白浓度太低，请教大家 [打印本页]
作者: exosun    时间: 2016-11-15 13:05
标题: 外泌体BCA测出蛋白浓度太低，请教大家
我用2016年的protocol超离的外泌体，看不到沉淀，重悬在200ulPBS中-80保存，4天后不加裂解液，直接BCA测定蛋白浓度，想跑标志蛋白的western，蛋白浓度很低，只有0.396ug/ul，请问大家可能是哪里出了问题？
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul， 浓度还可以，一般上样量5－10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了（CD63，Tsg101，Flotilin 1）。
作者: exosun    时间: 2016-11-16 00:16
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul， 浓度还可以，一般上样量5－10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了（CD63，Tsg101，Flotilin 1 ...

谢谢，明天就准备干起来了！
作者: 张外泌体    时间: 2016-12-22 08:43
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul， 浓度还可以，一般上样量5－10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了（CD63，Tsg101，Flotilin 1 ...

你好，我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体，结果怎么都做不出来，想问下是抗体的原因吗？电镜做了能看到外泌体的结构
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2016-12-23 01:56
张外泌体 发表于 2016-12-22 08:43
你好，我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体，结果怎么都做不出来，想问下是抗体的原因吗？ ...

CD63：Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1： BD Bioscience
这些是我用的抗体，效果还不错。
你试试actin或GAPDH抗体，外泌体中可以检测到这两个蛋白。或者转膜后用立春红染色看看蛋白含量。
作者: 张外泌体    时间: 2016-12-23 09:01
baishixiaoyaozi 发表于 2016-12-23 01:56
CD63：Santa Cruz
TSG101 and Flotillin 1： BD Bioscience
这些是我用的抗体，效果还不错。

我试一下，太谢谢你了
作者: 今日事今日毕    时间: 2017-1-3 11:12
楼主，新手问一下，你BCA测浓度，是用的试剂盒吗
作者: exosun    时间: 2017-2-12 19:08
今日事今日毕 发表于 2017-1-3 11:12
楼主，新手问一下，你BCA测浓度，是用的试剂盒吗

都是实验室可以直接领的试剂，没有试剂盒。
作者: JKF    时间: 2018-1-23 21:23
我也没有看到沉淀，正在测浓度
作者: JKF    时间: 2018-1-23 21:25
张外泌体 发表于 2016-12-22 08:43
你好，我测出来的浓度已经达到了0.5ug/ul,用的是国产抗体，结果怎么都做不出来，想问下是抗体的原因吗？ ...

测BCA 需要先裂解吗
作者: huangjingwei24    时间: 2018-4-18 16:01
baishixiaoyaozi 发表于 2016-11-15 23:21
0.4ug/ul， 浓度还可以，一般上样量5－10ug左右就可以检测到绝大部分标志蛋白了（CD63，Tsg101，Flotilin 1 ...

请教一下，按照这个标准，蛋白浓度 0.4ug/ul，总上样量5ug， 也需要125ul了啊，SDS-PAGE最大的孔也就80ul吧。
我也遇到WB检测不出来标志蛋白条带的情况。
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2018-4-19 00:07
huangjingwei24 发表于 2018-4-18 16:01
请教一下，按照这个标准，蛋白浓度 0.4ug/ul，总上样量5ug， 也需要125ul了啊，SDS-PAGE最大的孔也就80ul ...

5 ÷ 0.4 = 12.5ul
我应该没算错吧。
作者: baishixiaoyaozi    时间: 2018-4-19 00:09
huangjingwei24 发表于 2018-4-18 16:01
请教一下，按照这个标准，蛋白浓度 0.4ug/ul，总上样量5ug， 也需要125ul了啊，SDS-PAGE最大的孔也就80ul ...

5 ÷ 0.4 = 12.5ul
我应该没算错吧。
作者: DBLB    时间: 2019-10-11 19:11
baishixiaoyaozi 发表于 2018-4-19 00:07
5 ÷ 0.4 = 12.5ul
我应该没算错吧。

您好，我检测出来蛋白质浓度很低，基本上检测不到，用BCA检测只有30ng/ul左右，但是WB却没有问题，条带很亮。请问这种情况怎么办。我想知道我提取出来的外泌体的真实蛋白浓度。
作者: CheungKL    时间: 2019-10-22 14:47
DBLB 发表于 2019-10-11 19:11
您好，我检测出来蛋白质浓度很低，基本上检测不到，用BCA检测只有30ng/ul左右，但是WB却没有问题，条带很 ...

你好，请问你wb的外泌体样品是怎么处理的？跑的是哪些marker呢？谢谢
作者: DBLB    时间: 2019-10-22 15:00
CheungKL 发表于 2019-10-22 14:47
你好，请问你wb的外泌体样品是怎么处理的？跑的是哪些marker呢？谢谢

200ml培养上清超离，2mlPBS重悬。检测了CD63
作者: zhangchao    时间: 2020-7-6 18:50
JKF 发表于 2018-1-23 21:25
测BCA 需要先裂解吗

你好 你裂解了么
作者: zhangchao    时间: 2020-7-9 18:08
exosun 发表于 2017-2-12 19:08
都是实验室可以直接领的试剂，没有试剂盒。

你好，请问外泌体的裂解你是怎么配制的呀
作者: sy123    时间: 2022-3-22 17:46
我提的外泌体：40ml细胞上清   沉淀法提取   200ul重悬  BCA测浓度  0.3ug/ul  
作者: kaduoniya    时间: 2022-3-25 11:13
sy123 发表于 2022-3-22 17:46
我提的外泌体：40ml细胞上清   沉淀法提取   200ul重悬  BCA测浓度  0.3ug/ul

请问，您用的是什么细胞，培养多久后收集的细胞上清
作者: sy123    时间: 2022-4-22 20:21
kaduoniya 发表于 2022-3-25 11:13
请问，您用的是什么细胞，培养多久后收集的细胞上清

MDA-MB231  48小时 方便加一个微信聊吗？还想请教你一些问题，13652032811
作者: 1016646059@qq.c    时间: 2022-8-14 21:48
请问一下  我用裂解液裂解了之后BCA测的蛋白浓度为0.2ug/ul，上样量30ul  直接是白板
想试一下不裂解跑一次 不裂解的话直接加loading buffer需要加多少呀
还有如果要和细胞裂解液一起 是不是要保证两者的蛋白含量一致
作者: 发货33    时间: 2022-9-12 10:11
发祥于中国北部、朝鲜、日本、俄罗斯等北半球温带地区。据记载，公元前古巴比伦、古希腊已广泛种植。其中在古希腊的建筑装饰、铸造的钱币和克里特岛的壁画中，都发现有用玫瑰花做主题的雕刻及绘画。  公元初期，古罗马帝国开始兴盛，古埃及人把西南亚的玫瑰贩往罗马。12世纪后，欧洲各国兴起玫瑰种植业，尤其在英国

澳洲幸运5开奖直播 极速飞艇开奖直播 168开奖网结果
作者: wxx    时间: 2022-10-12 21:31
sy123 发表于 2022-3-22 17:46
我提的外泌体：40ml细胞上清   沉淀法提取   200ul重悬  BCA测浓度  0.3ug/ul

您好，请问你的是什么细胞呢？还有细胞数大概是多少呢



欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (https://www.exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3