GW4869抑制效果不佳

eastpoison · 发表于 2018-5-3 22:06:58

求问各位大佬们有没有遇见过GW4869处理后，收集细胞上清提取外泌体反而含量增加或者没变的情况啊。

我看文献中用2.5，5，10mM GW4869处理Hela细胞两天时候对外泌体都有很明显的抑制现象，但我却一直做不出来.....反而有时候能观察到增加

用的GW4869是sigma的....

真的是极端的崩溃啊

大鹰 · 发表于 2018-5-4 16:06:29

怎么确定增加的？荧光还是ache？一般不是10uM 你确定你浓度没问题

芝麻配海带 · 发表于 2018-5-7 10:23:09

你的细胞密度怎么样血清是否含有外泌体？？

eastpoison · 发表于 2018-5-7 14:23:49

大鹰发表于 2018-5-4 16:06
怎么确定增加的？荧光还是ache？一般不是10uM 你确定你浓度没问题

嗯嗯，配制的浓度是10mM,终浓度10uM,...
定量检测了gapdh，wb检测了CD63...都有增加

eastpoison · 发表于 2018-5-7 14:24:31

芝麻配海带发表于 2018-5-7 10:23
你的细胞密度怎么样血清是否含有外泌体？？

细胞密度可能会偏大一点，90%以上了
血清是过夜离心去了外泌体的

huang_0207 · 发表于 2018-5-8 09:49:47

我用了MCE家的GW4869.20μM浓度培养了两天，提取外泌体做qPCR检测细胞和外泌体内的某miRNA的变化，还是很明显的

eastpoison · 发表于 2018-5-8 16:52:02

huang_0207 发表于 2018-5-8 09:49
我用了MCE家的GW4869.20μM浓度培养了两天，提取外泌体做qPCR检测细胞和外泌体内的某miRNA的变化，还是很明 ...

浓度都上到20了啊.....不知道您有没有砸过标志蛋白呀

huang_0207 · 发表于 2018-5-12 18:57:39

eastpoison 发表于 2018-5-8 16:52
浓度都上到20了啊.....不知道您有没有砸过标志蛋白呀

不好意思，没有。。。

SYSUCC-Deng · 发表于 2018-5-14 09:33:58

想问下你的GW4869能溶吗？MCE官网GW4869说明书：DMSO: 0.044 mg/mL (Need ultrasonic and warming)。之前买过selleck的，很难溶。

eastpoison · 发表于 2018-5-15 16:56:37

SYSUCC-Deng 发表于 2018-5-14 09:33
想问下你的GW4869能溶吗？MCE官网GW4869说明书：DMSO: 0.044 mg/mL (Need ultrasonic and warming)。之前买 ...

一般会配成悬浮液

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GW4869抑制效果不佳

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