麻烦大神们鉴定一下电镜图

hzangs

这是我拍的，利用试剂盒沉淀的样品。 这张图是特地拍了一下 样品里的球状结构。这个可以肯定不是外泌体，具体是什么 还不清楚，可能是血清里的蛋白团聚形成的结晶。
楼主的图中拍到的 基本和这个图里的类似，所以  可能楼主拍到的不是外泌体。

hzangs

pytruth 发表于 2016-10-31 11:02
还想请教一下：1.第五张或者第六张图是细胞培液提取的，里面感觉有点茶托样结构，你觉得会是吗？
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给您图片的右下角打了号码。6号图的结构明显不是外泌体，可能是抱团的蛋白。7号图的结构明显直径过大。8号图结构不清晰，看上去不是很像。9号图结构直径过大。
我之前拍的电镜图  都不用戊二醛固定。 直接使用铀盐负染后放置十几分钟 就上机，不会有影响。
thery的方法 分离血清中的外泌体还是需要事先稀释血清的，杂蛋白是有的，量不大。

hzangs

pytruth 发表于 2016-10-31 20:34
谢谢版主！血清我是稀释后超离的，2ml稀释到了12ml，超离前还过了0.22um滤膜。版主的意思是我的图里照的 ...

不要倒……  要吸……
要吸掉上清…… 倒的话 真的会倒掉很多沉淀的
还有  一般血清稀释10-20倍。 你可以把2ml稀释到20-30ml   我们一般是0.5mL稀释到12ml

hzangs

pytruth 发表于 2016-11-1 14:52
好的，谢谢，超离完两次都要用枪吸吧？第二次超离完要吸的干净一点再加入pbs溶解？我第一次超离完好像还 ...

第一次不要吸太干净。   你很可能把沉淀给扔掉了……  所以你第一次能看到沉淀，洗一次就看不到了  o(╯□╰)o。 过0.22滤膜 这个影响  我不知道， 没试过

hzangs

pytruth 发表于 2016-11-1 21:50
好的。请问用超滤管浓缩细胞培液再超离对外泌体得率有影响吗？我看有的文献超离转速更高，超离时间也长， ...

浓缩细胞培液后  细胞培液会变粘稠，反而不容易超离得到外泌体。 而提高转速和时间会不会提高得率，我没有试过，但理论上 不会，因为超离已经把所有的外泌体都超下来了，哪里还有外泌体。。。

hzangs

pytruth 发表于 2016-11-4 15:15
请问师兄有尝试过浓缩了细胞培液之后再超离吗？
是说45ml上清液直接离心要比浓缩后再超离得到的外泌体要 ...

100kd的没有尝试过。  你可以试试。  100KD的浓缩可能会好一些，我之前用10KD的浓缩过，浓缩后确实会很粘稠

hzangs

katekitekite 发表于 2016-11-8 16:33
版主  你浓缩后  用浓缩液稍微吹洗滤膜了么  感觉BCA测浓度差好多

我是要吹洗的