求助如何用FM1-43标记exo

baishixiaoyaozi

我用FM1－43标记的EVs处理过细胞。如果你想做体内实验的话，最好用FM1－43FX，可以PFA固定后再用荧光显微镜观察。

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hereissyk 发表于 2016-9-7 16:31
我想做电镜观察体内exosomes具体沉积于什么位置，这个具体没涉猎过，还烦请明示FM1-43FX这个后缀FX代表什 ...

校友你好。如果想用电镜观察体内exosomes，不适合使用FM系列荧光染料，应该用胶体金免疫电镜技术。
FX表示Fix，PFA是多聚甲醛polyformaldehyde。

baishixiaoyaozi

文献已读。看起来作者根据复染后颜色深浅不同来区分内源exosomes以及被FM1－43FX标记的exosomes。
对你的课题不了解，不过我不建议一开始就用电镜来观察exosomes，尤其是研究其组织定位，除非之前做过非常多的电镜实验，而且对不同的亚细胞结构非常熟悉。你可以尝试着先用荧光显微镜观察FM1－43标记的exosomes，步骤会比较简单，而且con－focol显微镜还是比较常见的，core facility应该有的。
我毕业好久了，我们可以通过这个论坛交流，祝实验顺利。

baishixiaoyaozi

如果有不错的前期数据，不妨试试电镜。有几个问题想请教一下，你们实验室怎么定量exosomes，BCA法还是nano particle tracking system？PKH染料标记exosomes后处理细胞，非特异性背景荧光强吗？