血清离心去除外泌体的方法及用该血清配置的培养基的培...
用细胞培养上清提取外泌体，需用不含外泌体的血清，一般先离心处理血清。文献报道的方法不一，我看到的用的比较多的方法是 110000g，12h。但是没有介绍离心之后具体的处理方法，比如丢弃多少沉淀？可以直接倾倒收集上清吗？还是要用移液器慢慢转移？此外，因为离心血清费时耗力，培养细胞的时候是不是可以先用没有离心的血清配置的培养基培养，在提取前24h or 48h 再换用离心过的血清配置的培养基呢？请各位大侠不吝赐教！
我一般是FBS 直接上机超离120000g 14-16h，然后移液器吸取上清 留下超离体积10%左右的FBS（血清里的外泌体会在这部分里）， 上清转移到新管子 再过0.45um的滤器除一次菌。 细胞培养的时候 每次铺50%密度的细胞，然后培养72小时收上清，再直接将细胞按50%的密度传代，这样3天收一次，一直使用exosome free的FBS配置的培液。
含有外泌体的那10%的FBS 不要丢弃，怪浪费的。你可以用来冻存细胞。 如果你有状态不好的细胞 也可以用这个FBS配置的培液养一养试试，我师弟曾经尝试过，这剩下的10%的FBS 养细胞 细胞状态可好了！！！{:3_46:} 自己顶一下！ 再顶！烦请各位老师解答！ hzangs 发表于 2016-7-25 21:40
我一般是FBS 直接上机超离120000g 14-16h，然后移液器吸取上清 留下超离体积10%左右的FBS（血清里的外泌 ...
你提供的信息太有用了，Thank you very much! 下里巴人 发表于 2016-7-26 02:01
你提供的信息太有用了，Thank you very much!
不用客气:) 请问可以先用没有离心的血清配置的培养基培养，在提取前24h or 48h 再换用exo-free血清配置的培养基吗？
Aurorachen 发表于 2016-7-26 16:00
请问可以先用没有离心的血清配置的培养基培养，在提取前24h or 48h 再换用exo-free血清配置的培养基吗？
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可以的。 hzangs 发表于 2016-7-25 21:40
我一般是FBS 直接上机超离120000g 14-16h，然后移液器吸取上清 留下超离体积10%左右的FBS（血清里的外泌 ...
版主老师 你好 鉴于你培养3天的细胞我觉得还是得看是什么细胞我体外培养B细胞可撑不到3天还有就是你培养3天96孔板的话是多久换一次无Ex的培养液呢 免疫小子 发表于 2016-7-26 20:49
版主老师 你好 鉴于你培养3天的细胞我觉得还是得看是什么细胞我体外培养B细胞可撑不到3天还有就是 ...
要看细胞的。 有些细胞根本养不了那么久所以就要早点收。 我养的tumor cell还是可以的。 我是用15cm dish 养的， 3天内不换液。
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