外泌体测不出浓度怎么办?
超速离心提取的HEK293细胞外泌体,用CD63做western检测,条带很清晰,但是用BCA试剂盒或者OD280测浓度都显示为零或负值,外泌体用RIPA(强效)裂解后再测,还是测不出来,大家有过这样的经历吗?求指点! 子非鱼 发表于 2015-12-11 21:29我看最近的一篇文献,exosome提出来直接就去测浓度了,而且做HPLC-MS貌似都是直接做的,不经过提蛋白,看 ...
我没有找到裂解exosome再测浓度的文献,exosome表面有很多膜蛋白包裹,我觉得可以直接测,贴壁细胞分泌的量比较少,可能要用灵敏度高,测定范围微量的试剂盒,血清的就比较多,普通的蛋白浓度试剂盒都可以。 感谢各位战友的热心帮助,浓度问题已解决,是由于外泌体浓度较低,超出了BCA试剂盒的检测范围,换成灵敏度更高的试剂盒就好了。希望能对遇到类似问题的战友有所帮助。 对照组调零有差错吧 你做WB的时候外泌体直接上样 不先进行裂解吗? kasangzc 发表于 2015-11-20 09:06
你做WB的时候外泌体直接上样 不先进行裂解吗?
做WB时候,外泌体用PBS溶解后直接加SDS-PAGE loading Buffer,100度变性5min,上样。 zqy2002 发表于 2015-11-19 19:47
对照组调零有差错吧
对照组调零应该没有问题。 毛毛 发表于 2015-11-20 13:35
做WB时候,外泌体用PBS溶解后直接加SDS-PAGE loading Buffer,100度变性5min,上样。 ...
还原还是非还原呢?:P 毛毛 发表于 2015-11-20 13:35
做WB时候,外泌体用PBS溶解后直接加SDS-PAGE loading Buffer,100度变性5min,上样。 ...
同意,不需要裂解
毛毛 发表于 2015-11-20 13:37
对照组调零应该没有问题。
既然BCA测试都出现负数了,你说应不应该对照组出错。否则你用水测试一下看是不是负值。 毛毛 发表于 2015-11-20 13:35
做WB时候,外泌体用PBS溶解后直接加SDS-PAGE loading Buffer,100度变性5min,上样。 ...
我看最近的一篇文献,exosome提出来直接就去测浓度了,而且做HPLC-MS貌似都是直接做的,不经过提蛋白,看你这也是这么直接,难道真的可以?请问,你这个步骤有没有文献支持啊?求分享~~
页:
[1]
2