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lixiaoshuang 发表于 2021-1-27 15:00:02

关于0.22um的滤膜过滤外泌体溶液

看文献有说PBS重悬后的外泌体溶液用0.22um的过滤器进行过滤，去除大颗粒。目前有几个问题想请教一下各位同行：
1. 0.22um的过滤器，孔径是0.22um，那直径应该选择多大的呢？我看直径有33mm的，也有55mm的，也有其他size的。
2. 哪种品牌的过滤器比较好呢？
3. 100ul PBS重悬后的外泌体溶液，过滤后还能剩下多少外泌体溶液呢？

hzangs 发表于 2021-1-28 19:36:08

一般来说， 如果你先进行了10000g 30分钟的离心， 那就不需要过滤器了。

lixiaoshuang 发表于 2021-1-29 10:27:34

hzangs 发表于 2021-1-28 19:36
一般来说， 如果你先进行了10000g 30分钟的离心， 那就不需要过滤器了。

我的样本类型是血浆，用的SBI的试剂盒沉淀外泌体。第一步我先将血浆样本室温3000g离心15分钟，目的是去除细胞碎片，然后将上清转移到新的离心管中，加凝血酶处理，之后按照说明书进行操作。没有10000g离心30分钟过。电镜图片显示有很多杂蛋白背景。

zz562 发表于 2021-2-1 00:02:54

请问一下，有人知道外泌体用电穿孔仪后发生沉淀是因为什么嘛?

gywfind 发表于 2021-3-11 16:41:14

其实奋斗就是每天踏踏实实地过好日子，做好手头的没件小事，不拖拉、不抱怨、不推卸、不偷懒。每一天一点一滴的努力，才能汇集起千万勇气，带着你的坚持，引领你到你想要到的地方去。













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weisiren1 发表于 2021-12-20 22:45:36

hzangs 发表于 2021-1-28 19:36
一般来说， 如果你先进行了10000g 30分钟的离心， 那就不需要过滤器了。

请问答主，有没有文献支持这种说法呢？本人目前投稿，做了10000g离心30分钟这一步，被审稿人质疑没有加入0.22过滤，得到的外泌体不纯，不知道能不能引用相关文献回复它

sy123 发表于 2022-4-22 20:25:42

weisiren1 发表于 2021-12-20 22:45
请问答主，有没有文献支持这种说法呢？本人目前投稿，做了10000g离心30分钟这一步，被审稿人质疑没有加入 ...

请问：MDA-MB231，160ml上清，用100kd超滤浓缩至30ml，用试剂盒沉淀提取，测BCA 380ug/ml，但是做WB几次都没有标志物条带，这是怎么回事，难道这些都是杂蛋白吗？

15511958250 发表于 2022-10-19 10:11:12

sy123 发表于 2022-4-22 20:25
请问：MDA-MB231，160ml上清，用100kd超滤浓缩至30ml，用试剂盒沉淀提取，测BCA 380ug/ml，但是做WB几次 ...

沉淀提取后得多少μl？不排除杂蛋白的可能，可以做个电镜，NTA看一下

stonesli 发表于 2023-4-13 18:40:53

lixiaoshuang 发表于 2021-1-29 10:27
我的样本类型是血浆，用的SBI的试剂盒沉淀外泌体。第一步我先将血浆样本室温3000g离心15分钟，目的是去除 ...

请教一下，为什么要加凝血酶处理呢？血浆提取外泌体的详细步骤能分享一下吗？我收集的血浆都处于-80冻存转态，时间长了有影响吗？并且血浆不太多，一般需要多少体积呢？

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