evomicscience
发表于 2015-10-26 14:19:12
赞赞!多谢你的回复。但也要考虑到半透膜浓缩尿液可能降低尿exosome收率。1.疏水的exosome粘在膜上,不容易回收,2.尿蛋白THP可能会网住一些exosome,3. 还可能有成本,耗时问题。尿液exosome很有前途,大家现在还没认识到。
咏咩咩
发表于 2015-11-1 17:43:33
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白,量太大,网住了大量的Exosome,DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...
有兴趣~我在做尿液EV。想问下提了囊泡做WB看标志物前测蛋白浓度要不要加裂解液呢?有没有具体的步骤?谢谢~~
丝瓜
发表于 2015-11-1 20:17:40
hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子,我尝试过含血清培液浓缩50倍上样,分离结果也不错
上次您是浓缩了50倍上样的,有没有试过浓缩倍数更高的?会不会造成较大的损耗?
丝瓜
发表于 2015-11-1 20:18:03
hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子,我尝试过含血清培液浓缩50倍上样,分离结果也不错
上次您是浓缩了50倍上样的,有没有试过浓缩倍数更高的?会不会造成较大的损耗?
hzangs
发表于 2015-11-1 20:21:53
丝瓜 发表于 2015-11-1 20:18
上次您是浓缩了50倍上样的,有没有试过浓缩倍数更高的?会不会造成较大的损耗? ...
我使用qEV的凝胶排阻柱子做的试用。 样品为还exosomes-free FBS的细胞培养上清液。 50倍是我尝试的最高浓缩倍数了。 没有再高的尝试。
没有做过尿液的,不知道会怎么样。
50倍浓缩结果看,凝胶排阻柱子分离和超速离心分离 的收率差不多,不存在太大损耗。 尿液你可以自己尝试一下~
会飞的盈盈
发表于 2016-1-31 12:38:45
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白,量太大,网住了大量的Exosome,DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...
我也做尿液方面,能不能留个联系方式
Mxiansheng
发表于 2016-2-16 16:49:27
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白,量太大,网住了大量的Exosome,DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...
如何消除THP蛋白呢
evomicscience
发表于 2016-2-22 08:27:45
会飞的盈盈 发表于 2016-1-31 12:38
我也做尿液方面,能不能留个联系方式
evomicscience@163.com
咏咩咩
发表于 2016-2-23 11:01:35
Mxiansheng 发表于 2016-2-16 16:49
如何消除THP蛋白呢
很多是用DTT或者CHAPS的...看过一篇文献用胰酶的..
丫丫
发表于 2016-10-24 11:22:34
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白,量太大,网住了大量的Exosome,DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...
您好,您说尿液中的Exosome含量太低,那一般从尿液中提的话要用多少体积呢?